| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第15-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-44页 |
| ·炭疽 | 第17-39页 |
| ·病原学 | 第17-18页 |
| ·炭疽 | 第18-20页 |
| ·流行病学 | 第20-21页 |
| ·炭疽的诊断 | 第21-22页 |
| ·毒力(相关)因子 | 第22-26页 |
| ·炭疽杆菌致病机制 | 第26-32页 |
| ·炭疽杆菌作为生物战和生物武器的威胁 | 第32-33页 |
| ·炭疽疫苗 | 第33-36页 |
| ·显性抑制PA | 第36-39页 |
| ·基因体外定点诱变技术 | 第39-44页 |
| ·PCR介导的定点诱变 | 第39-41页 |
| ·不依赖PCR的定点诱变 | 第41-42页 |
| ·定点饱和突变技术 | 第42-44页 |
| 第2章 定点饱和突变炭疽保护性抗原第427aa并筛选高抑制活性的突变体用作炭疽疫苗和毒素抑制剂 | 第44-84页 |
| ·材料和方法 | 第45-51页 |
| ·细菌菌株与细胞 | 第45页 |
| ·载体与质粒 | 第45-47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·培养基与抗生素配制 | 第47-48页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第48-51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-61页 |
| ·LF及PA基因的克隆 | 第51-54页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第54-57页 |
| ·重组炭疽毒素蛋白的生物活性分析 | 第57-58页 |
| ·保护性抗原PA第427位氨基酸的定点饱和突变 | 第58页 |
| ·突变体蛋白的表达纯化及活性鉴定 | 第58-59页 |
| ·突变体的体外显性抑制活性分析 | 第59页 |
| ·突变体的体内显性抑制活性 | 第59-60页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-79页 |
| ·LF基因和 PA基因的PCR扩增和克隆结果 | 第61-62页 |
| ·PA和 LF在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第62-66页 |
| ·PA基因第427位氨基酸的定点饱和突变 | 第66-67页 |
| ·突变体蛋白的表达纯化及活性鉴定 | 第67-70页 |
| ·突变体蛋白的在体外抑制活性 | 第70-72页 |
| ·突变体蛋白的在体内抑制活性 | 第72-74页 |
| ·病理检测 | 第74-76页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第76-79页 |
| ·讨论 | 第79-84页 |
| ·PA和 LF蛋白的纯化 | 第79-80页 |
| ·应用炭疽致死毒素细胞模型分析毒素蛋白生物学活性 | 第80页 |
| ·PAF427X突变体的活性和显性抑制活性 | 第80-81页 |
| ·显性抑制突变体 PA用作炭疽疫苗和炭疽毒素抑制剂 | 第81-82页 |
| ·小鼠静脉注射炭疽毒素后体内的炎性反应 | 第82-84页 |
| 第3章 炭疽致死因子 N端介导融合抗原到细胞质中提高抗原免疫力的研究 | 第84-102页 |
| ·材料和方法 | 第85-87页 |
| ·菌株与培养条件 | 第85页 |
| ·质粒 | 第85-86页 |
| ·主要试剂及配制 | 第86-87页 |
| ·实验方法 | 第87-92页 |
| ·LFn融合基因的克隆 | 第87-88页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第88页 |
| ·LFn融合蛋白与 LF竞争性结合 | 第88-89页 |
| ·小鼠免疫 | 第89页 |
| ·Sao特异性 IgG及 IgG亚类抗体滴度的检测 | 第89页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第89-91页 |
| ·对免疫小鼠的保护力实验 | 第91页 |
| ·统计学方法 | 第91-92页 |
| ·结果与分析 | 第92-100页 |
| ·LFn融合基因的克隆 | 第92-94页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第94页 |
| ·LFn融合蛋白与LF的竞争结合 | 第94-95页 |
| ·Sao特异性IgG及IgG亚类抗体滴度的检测 | 第95-97页 |
| ·细胞免疫 | 第97-99页 |
| ·对小鼠的免疫保护 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 第4章 LF毒力丢失突变体的筛选及其机理研究 | 第102-121页 |
| ·实验材料和方法 | 第103-108页 |
| ·菌株与质粒 | 第103页 |
| ·主要试剂及配制 | 第103页 |
| ·Y236F的生物活性 | 第103-104页 |
| ·高通量筛选 LF突变体模型的建立 | 第104页 |
| ·HSTDH结构活性分析 | 第104-105页 |
| ·LF结构域2，3，4内组氨酸的定点突变 | 第105-107页 |
| ·LF中在MEK2切割位点3A内的氨基酸的活性分析 | 第107-108页 |
| ·蛋白质构象分析 | 第108页 |
| ·结果与分析 | 第108-117页 |
| ·Y236F的生物活性分析 | 第108-110页 |
| ·高通量筛选 LF突变体模型的建立 | 第110页 |
| ·HSTDH结构活性分析 | 第110-111页 |
| ·LF结构域2，3，4内组氨酸的活性分析 | 第111-116页 |
| ·LF中在MEK2切割位点3A内的氨基酸的活性分析 | 第116-117页 |
| ·讨论 | 第117-121页 |
| ·Y236F的活性及免疫原性 | 第117页 |
| ·突变体库的筛选 | 第117-118页 |
| ·锌离子motif结构的分析 | 第118页 |
| ·蛋白酶活性氨基酸位点的分析 | 第118-119页 |
| ·底物切割活性氨基酸位点的分析 | 第119-121页 |
| 第5章 结论 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| Curriculum Vitae | 第136-137页 |
