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影响猪肌肉生长及肉质相关四个候选基因的分离、鉴定

摘要第1-13页
ABSTRACT第13-18页
资源家系测定性状的英文缩写第18-19页
第一章 文献综述第19-37页
   ·前言第19页
   ·猪肌肉生长发育及品质相关的候选基因研究进展第19-25页
     ·已明确的主效基因第19-21页
     ·其它主效基因第21-25页
   ·基因差异表达的研究方法第25-31页
     ·消减杂交第25页
     ·mRNA差异显示技术(DD-PCR)第25-26页
     ·代表性序列差别分析(RDA)第26页
     ·抑制消减杂交技术(SSH)第26-28页
     ·基因表达序列的分析(SAGE)第28页
     ·基因芯片技术(Microarray)第28-31页
       ·基因芯片的使用操作第29页
       ·基因芯片技术在猪的遗传育种中的应用第29-31页
   ·电脑克隆在分离新基因中的应用第31-32页
   ·拟分离基因的研究现状第32-37页
     ·β1整合蛋白结合蛋白2(melusin)第32-33页
     ·载脂蛋白M(APOM)第33-34页
     ·肌肉强直性营养不良蛋白激酶(DMPK)第34-35页
     ·葡萄糖6磷酸酶转运亚基(G6PT)第35-37页
第二章 研究的目的和意义第37-38页
第三章 材料与方法第38-53页
   ·试验材料第38-41页
     ·试验样品第38-39页
       ·DNA样品第38页
       ·组织样品第38-39页
     ·主要试剂及配制第39-41页
       ·主要试剂第39页
       ·主要溶液第39-41页
     ·主要仪器和设备第41页
   ·试验方法第41-53页
     ·总RNA的提取及cDNA第一链和SMART cDNA的合成第41-44页
       ·总RNA的提取第41-42页
       ·cDNA第一链的合成第42页
       ·SMART cDNA的合成第42-44页
     ·候选基因cDNA序列的分离第44-45页
       ·利用电子克隆策略设计引物第44页
       ·RT-PCR方法扩增cDNA第44-45页
       ·RACE-PCR第45页
     ·外源片段回收、克隆和测序第45-46页
       ·PCR产物的回收第45-46页
       ·载体连接第46页
       ·连接产物的转化第46页
       ·阳性克隆子鉴定及测序第46页
     ·DNA序列的生物信息学分析第46-47页
     ·候选基因基因组序列的分离第47-48页
       ·猪血液基因组DNA的提取第47-48页
       ·候选基因扩增基因组序列引物设计第48页
       ·PCR反应第48页
       ·PCR产物回收、纯化和克隆测序第48页
       ·DNA序列的生物信息学分析第48页
     ·表达谱分析第48-51页
       ·RT-PCR组织表达谱分析第50页
       ·Real-time RT-PCR不同品种、不同发育阶段骨骼肌中的表达分析第50-51页
     ·多态位点的检测方法第51-52页
       ·引物设计第51页
       ·PCR-RFLP检测方法的建立第51-52页
     ·统计分析第52-53页
       ·分子标记在不同猪种中的等位基因频率及基因型频率计算第52页
       ·分子标记的基因效应分析第52-53页
第四章 结果与分析第53-104页
   ·猪基因组DNA以及总RNA的提取与质量检测结果第53-54页
   ·猪MELUSIN基因第54-72页
     ·猪melusin基因cDNA序列克隆及序列分析第54-58页
       ·猪melusin基因cDNA序列的扩增与测序第54页
       ·猪melusin基因cDNA序列的生物信息学分析第54-58页
     ·品种特异性melusin基因转录剪接体的分离与鉴定第58-61页
       ·大白猪中特异表达转录本的分离第58-59页
       ·特异表达转录本的生物信息学分析第59-60页
       ·转录本melusin-1特异表达鉴定第60-61页
     ·猪melusin基因基因组全长序列的克隆第61-65页
       ·猪melusin基因DNA片断扩增结果第61-62页
       ·猪melusin基因DNA序列生物信息学分析第62-65页
     ·猪melusin基因的组织表达谱分析第65页
     ·猪melusin基因的SNP检测及遗传效应分析第65-72页
       ·猪melusin基因的SNP扫描结果第65-66页
       ·5'调控区G419C的PCR-RFLP结果第66-67页
       ·内含子1中A902G的PCR-RFLP结果第67-68页
       ·内含子4中C3595T的PCR-RFLP结果第68-69页
       ·单倍型构建及其遗传效应分析第69-72页
   ·猪APOM基因第72-84页
     ·猪APOM基因cDNA序列克隆及序列分析第72-75页
       ·猪APOM基因cDNA序列的扩增及测序第72页
       ·猪APOM基因cDNA序列的生物信息学分析第72-75页
     ·猪APOM基因全长基因组序列的克隆第75-79页
       ·猪APOM基因DNA片段扩增结果第75-76页
       ·猪APOM基因DNA序列的生物信息学分析第76-79页
     ·猪APOM基因的比较定位第79-80页
     ·猪APOM基因的组织表达谱研究第80-81页
     ·猪APOM基因的SNP检测及遗传效应分析第81-84页
       ·猪APOM基因的SNP扫描结果第81页
       ·内含子2中G2289C的PCR-RFLP结果第81-82页
       ·内含子G2289C的遗传效应分析第82-84页
   ·猪DMPK基因第84-95页
     ·猪DMPK基因差异表达验证第84-85页
     ·猪DMPK基因cDNA序列克隆及序列分析第85-91页
       ·猪DMPK基因cDNA序列的扩增与测序第85-86页
       ·猪DMPK基因cDNA序列的生物信息学分析第86-91页
     ·猪DMPK全长基因组序列的克隆第91-95页
       ·猪DMPK基因DNA片段扩增结果第91-92页
       ·猪DMPK基因DNA序列生物信息学分析第92-95页
     ·猪DMPK基因的组织表达谱分析第95页
   ·猪G6PT基因第95-104页
     ·猪G6PT基因差异表达验证第95-96页
     ·猪G6PT基因cDNA序列克隆及序列分析第96-101页
       ·猪G6PT基因cDNA序列的扩增及测序第96-97页
       ·猪G6PT基因cDNA序列的生物信息学分析第97-101页
     ·猪G6PT全长基因组序列的克隆第101-103页
       ·猪G6PT基因DNA片段扩增结果第101-102页
       ·猪G6PT基因DNA序列生物信息学分析第102-103页
     ·猪G6PT基因的组织表达谱分析第103-104页
第五章 讨论第104-113页
     ·关于候选基因的筛选第104-108页
   ·利用电子克隆策略分离猪新基因第108-109页
   ·猪与其他物种基因组和氨基酸的保守性第109页
   ·关于半定量和实时定量PCR第109-110页
   ·内含子SNPs的遗传效应分析第110-111页
   ·分子标记在不同猪群间基因频率分布第111页
   ·分子标记的遗传效应分析第111-112页
   ·关于下一步工作第112-113页
小结第113-114页
参考文献第114-126页
致谢第126页

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