| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-44页 |
| ·FMD的危害及流行病学特点 | 第16-23页 |
| ·FMD的危害 | 第16-17页 |
| ·FMD的分布与流行 | 第17-19页 |
| ·FMD流行病学特征 | 第19-23页 |
| ·无FMD状态 | 第23页 |
| ·FMDV分子生物学研究进展 | 第23-32页 |
| ·基因组基本结构 | 第23-27页 |
| ·FMDV衣壳的装配 | 第27-28页 |
| ·病毒粒子抗原结构 | 第28-30页 |
| ·FMDV细胞受体研究 | 第30-32页 |
| ·FMDV的致病性与免疫机制 | 第32-33页 |
| ·FMDV的致病性 | 第32页 |
| ·免疫机制 | 第32-33页 |
| ·口蹄疫疫苗的研究进展 | 第33-44页 |
| ·FMDV传统疫苗 | 第33-34页 |
| ·FMDV新型疫苗 | 第34-35页 |
| ·FMDV新型疫苗的研究探讨 | 第35-44页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第44-45页 |
| 第3章 材料与方法 | 第45-72页 |
| ·试验材料 | 第45-54页 |
| ·毒株与细胞 | 第45页 |
| ·菌种与质粒 | 第45-49页 |
| ·主要药品及试剂 | 第49页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第49-50页 |
| ·血清 | 第50页 |
| ·缓冲液 | 第50-54页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-72页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第54-55页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第55页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第55页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第56页 |
| ·连接产物的转化 | 第56-57页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第57-59页 |
| ·伪狂犬病毒(PRV)基因组DNA的提取 | 第59页 |
| ·脂质体共转染法 | 第59-60页 |
| ·重组病毒的蚀斑纯化 | 第60-61页 |
| ·PCR检测目的外源基因在重组病毒中的整合 | 第61页 |
| ·Southern blot印迹分析 | 第61-62页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第62-63页 |
| ·构建重组杆状病毒的操作流程及示意图 | 第63-64页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的构建 | 第64页 |
| ·重组穿梭载体(Bacmid)的提取 | 第64-65页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第65页 |
| ·重组杆状病毒转导PK-15细胞 | 第65页 |
| ·猪外周全血培养及诱导 | 第65页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第65页 |
| ·Western blotting检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第65-67页 |
| ·P1-ELISA试验 | 第67页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第67-68页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第68页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第68-70页 |
| ·动物试验 | 第70-71页 |
| ·统计学方法 | 第71-72页 |
| 第4章 结果与分析 | 第72-103页 |
| ·FMDV重组PRV多价基因工程疫苗的构建和免疫效果研究 | 第72-79页 |
| ·转移质粒pIEFHG的构建 | 第72页 |
| ·重组病毒的构建与纯化 | 第72-73页 |
| ·重组病毒的Southern杂交鉴定 | 第73-74页 |
| ·重组病毒的Western杂交鉴定 | 第74-75页 |
| ·外源基因的多点同时插入对重组病毒在细胞上增殖的影响 | 第75页 |
| ·重组病毒免疫仔猪诱发抗PRV中和抗体的检测 | 第75页 |
| ·重组病毒免疫仔猪诱发抗PRV ELISA抗体的检测 | 第75-77页 |
| ·重组病毒免疫仔猪诱发抗FMDV中和抗体的检测 | 第77-78页 |
| ·重组病毒免疫仔猪诱发特异性针对FMDV淋巴细胞增殖水平检测 | 第78-79页 |
| ·O型FMDV"自杀性"DNA疫苗的构建和免疫效果的研究 | 第79-86页 |
| ·形成FMDV空衣壳的多基因片段的克隆与序列分析 | 第79-81页 |
| ·FMDV空衣壳真核表达质粒pceCAP的构建 | 第81-82页 |
| ·"自杀性"DNA疫苗pSCAI-eCAP的构建 | 第82页 |
| ·FMDV空衣壳体外表达检测 | 第82-83页 |
| ·免疫小鼠的中和抗体水平检测 | 第83页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平检测 | 第83-85页 |
| ·免疫小鼠脾细胞分泌的IFN-γ水平分析 | 第85页 |
| ·病毒血症试验 | 第85-86页 |
| ·杆状病毒介导的FMDV空衣壳的表达及小鼠免疫试验 | 第86-93页 |
| ·转移载体pFast-eCAP的构建 | 第86页 |
| ·转移载体pFast-VSVG-CMV-eCAP的构建 | 第86页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第86-87页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第87页 |
| ·重组杆状病毒Ac-eCAP的体外表达检测 | 第87-88页 |
| ·重组杆状病毒Ac-V-eCAP转导哺乳动物细胞 | 第88-89页 |
| ·重组杆状病毒Ac-V-eCAP的纯化与毒价测定 | 第89-90页 |
| ·免疫小鼠的中和抗体水平 | 第90页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第90-91页 |
| ·免疫小鼠脾细胞分泌的IFN-γ水平分析 | 第91-92页 |
| ·病毒血症试验 | 第92-93页 |
| ·猪源髓细胞分化因子MyD88作为分子佐剂对FMDV DNA疫苗免疫效力影响的研究 | 第93-103页 |
| ·猪源髓细胞分化因子MyD88的克隆与序列分析 | 第93-97页 |
| ·猪源髓细胞分化因子MyD88的分子建模 | 第97页 |
| ·真核表达MyD88质粒pcMyD88的构建 | 第97-98页 |
| ·MyD88体外表达检测 | 第98页 |
| ·MyD88与FMDV空衣壳共表达质粒pcMyD88-eCAP的构建 | 第98-99页 |
| ·免疫小鼠的中和抗体水平 | 第99-100页 |
| ·免疫小鼠的ELISA抗体水平 | 第100-101页 |
| ·免疫小鼠脾细胞分泌的IFN-γ水平分析 | 第101页 |
| ·病毒血症试验 | 第101-103页 |
| 第5章 讨论与总结 | 第103-115页 |
| ·讨论 | 第103-114页 |
| ·FMDV的抗原表位分布及免疫原性 | 第103-104页 |
| ·伪狂犬病毒载体 | 第104-105页 |
| ·共转染与噬斑纯化 | 第105-106页 |
| ·多点同时插入外源基因对伪狂犬病毒增殖和毒力的影响 | 第106页 |
| ·外源基因在重组病毒中的表达 | 第106-107页 |
| ·重组病毒诱导的免疫反应 | 第107-108页 |
| ·病毒样颗粒疫苗的应用前景 | 第108-109页 |
| ·FMDV病毒样颗粒的形成 | 第109页 |
| ·表达FMDV病毒样颗粒的"自杀性"DNA疫苗的构建和免疫原性研究 | 第109-110页 |
| ·VSV-G修饰的重组杆状病毒的构建 | 第110-111页 |
| ·重组杆状病毒诱导的免疫应答 | 第111-112页 |
| ·cross-over PCR方法在猪源髓细胞分化因子MyD88克隆中的应用 | 第112页 |
| ·猪源髓细胞分化因子MyD88作为分子佐剂对FMDV DNA疫苗免疫效果的影响 | 第112-114页 |
| ·结论 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附录 | 第128-129页 |
