| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 1 前言 | 第16-33页 |
| ·研究问题的由来 | 第16-17页 |
| ·骨骼肌细胞的发生发育过程 | 第17-18页 |
| ·肌纤维分类及特征 | 第18-19页 |
| ·肌纤维组成与肌肉品质 | 第19-20页 |
| ·影响肌纤维分布的因素 | 第20-22页 |
| ·品种 | 第20页 |
| ·肌肉类型 | 第20-21页 |
| ·性别和年龄 | 第21页 |
| ·激素 | 第21-22页 |
| ·其他 | 第22页 |
| ·骨骼肌细胞发生发育中的分子调控 | 第22-26页 |
| ·MRFs转录因子家族 | 第23-24页 |
| ·MEF2转录因子家族 | 第24页 |
| ·Pax3和Pax7基因 | 第24-25页 |
| ·HATs和HDACs基因 | 第25页 |
| ·N-cadherin和β-Catenin | 第25页 |
| ·Wnt信号途径 | 第25-26页 |
| ·猪骨骼肌差异表达基因研究进展 | 第26-31页 |
| ·基因差异表达研究方法 | 第26-29页 |
| ·RNA差异显示技术 | 第26-27页 |
| ·抑制消减杂交技术 | 第27-28页 |
| ·cDNA微阵列和基因芯片 | 第28页 |
| ·基因表达连续分析 | 第28-29页 |
| ·猪骨骼肌基因差异表达研究现状 | 第29-31页 |
| ·研究目的和意义 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-58页 |
| ·主要仪器与设备 | 第33页 |
| ·试剂盒、试剂、载体及菌株 | 第33-37页 |
| ·试剂盒 | 第33-34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·主要溶液的配制 | 第34-36页 |
| ·载体、菌株及其它 | 第36-37页 |
| ·材料来源与样品制备 | 第37-40页 |
| ·总RNA分离 | 第37-39页 |
| ·建库用总RNA分离 | 第37-38页 |
| ·TRlpure试剂法分离总RNA | 第38-39页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·质量检测 | 第40页 |
| ·RNA浓度和纯度检测 | 第40页 |
| ·基因组DNA浓度和纯度检测 | 第40页 |
| ·SMART cDNA合成 | 第40-42页 |
| ·样品 | 第40-41页 |
| ·合成SMART dscDNA | 第41-42页 |
| ·抑制消减杂交 | 第42-48页 |
| ·Driver cDNA和Tester cDNA的制备 | 第43-45页 |
| ·双链cDNA纯化 | 第43-44页 |
| ·Rsa Ⅰ内切酶消化 | 第44页 |
| ·Driver cDNA的制备 | 第44页 |
| ·Tester cDNA的制备 | 第44-45页 |
| ·接头连接效率的检测 | 第45-46页 |
| ·检测连接效率的引物组合 | 第45页 |
| ·效率检测 | 第45-46页 |
| ·消减杂交 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增富集 | 第47页 |
| ·消减效率的检测 | 第47-48页 |
| ·消减cDNA文库的构建及鉴定 | 第48-52页 |
| ·消减文库的构建 | 第48-50页 |
| ·载体连接 | 第48页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| ·转化 | 第49页 |
| ·挑取阳性克隆 | 第49-50页 |
| ·消减cDNA文库的PCR筛选 | 第50页 |
| ·斑点杂交筛选阳性克降 | 第50-52页 |
| ·探针的制备 | 第50-51页 |
| ·斑点杂交 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆cDNA片段测序及序列分析 | 第52-53页 |
| ·阳性克隆测序 | 第52页 |
| ·EST序列分析 | 第52页 |
| ·EST对应的基因功能分类 | 第52-53页 |
| ·差异表达基因的RT-PCR验证 | 第53-54页 |
| ·定量PCR引物设计 | 第53页 |
| ·cDNA的合成 | 第53页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第53页 |
| ·定量RT-PCR反应 | 第53-54页 |
| ·差异表达基因的分析 | 第54-58页 |
| ·差异基因组织表达分析 | 第54页 |
| ·RNA的制备 | 第54页 |
| ·RT-PCR反应 | 第54页 |
| ·基因全长cDNA克隆 | 第54-55页 |
| ·电子延伸 | 第54-55页 |
| ·RACE-PCR | 第55页 |
| ·序列分析 | 第55页 |
| ·基因组片段的扩增 | 第55-56页 |
| ·SNP的寻找及突变位点分析 | 第56-57页 |
| ·计算机软件进行突变位点的找寻及验证 | 第56页 |
| ·突变位点的PCR-SSCP分析 | 第56-57页 |
| ·数据统计分析 | 第57页 |
| ·启动子序列获得与预测 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-95页 |
| ·总RNA的提取 | 第58页 |
| ·SMART dscDNA合成 | 第58-60页 |
| ·抑制消减杂交 | 第60-62页 |
| ·Driver cDNA和Tester cDNA的制备 | 第60-61页 |
| ·消减效率的检测 | 第61-62页 |
| ·消减cDNA文库的构建和筛选 | 第62-63页 |
| ·PCR鉴定 | 第62页 |
| ·斑点杂交验证 | 第62-63页 |
| ·阳性克隆测序及序列分析 | 第63-73页 |
| ·克隆测序 | 第63页 |
| ·EST聚类分析 | 第63-70页 |
| ·基因功能注释 | 第70-72页 |
| ·基因功能归类 | 第72-73页 |
| ·部分基因的实时定量PCR检测 | 第73-77页 |
| ·标准曲线 | 第74页 |
| ·熔解曲线 | 第74-75页 |
| ·差异表达基因的实时定量RT-PCR验证 | 第75-77页 |
| ·差异表达基因PDK4分子生物学特征分析 | 第77-88页 |
| ·PDK4基因的斑点杂交验证和半定量验证 | 第77页 |
| ·PDK4基因的时空表达分析 | 第77-78页 |
| ·全长cDNA克隆及序列分析 | 第78-83页 |
| ·突变位点的寻找及性状关联分析 | 第83-85页 |
| ·启动子序列扩增及分析 | 第85-88页 |
| ·差异表达基因TOB1的分子生物学特征分析 | 第88-95页 |
| ·TOB1在大白、梅山中的差异表达分析 | 第88页 |
| ·猪TOB1基因全长的获得及序列分析 | 第88-92页 |
| ·不同品种猪TOB1蛋白的序列突变分析 | 第92-93页 |
| ·TOB1基因的时空表达分析 | 第93-95页 |
| 4 讨论 | 第95-105页 |
| ·抑制消减杂交技术 | 第95-97页 |
| ·荧光定量PCR | 第97-98页 |
| ·内参的选择 | 第98页 |
| ·差异表达文库分析 | 第98-99页 |
| ·差异表达基因PDK4 | 第99-102页 |
| ·差异表达基因TOB1 | 第102-105页 |
| 小结 | 第105-107页 |
| 主要研究结果 | 第105-106页 |
| 主要创新点 | 第106页 |
| 本研究的不足之处 | 第106页 |
| 下一步工作计划 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录一 用于表达分析的引物 | 第117-118页 |
| 附录二 用于基因克隆的引物 | 第118-119页 |
| 论文发表情况 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120页 |