| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·未培养微生物的研究现状与发展前景 | 第13-14页 |
| ·未培养微生物的研究现状 | 第13-14页 |
| ·未培养微生物的发展前景 | 第14页 |
| ·宏基因组学的研究进展及其应用 | 第14-16页 |
| ·宏基因组学的概念 | 第14-15页 |
| ·宏基因组学的研究方法 | 第15页 |
| ·宏基因组学的应用 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶简介 | 第16-18页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的降解机理 | 第17页 |
| ·纤维素酶的产生菌株 | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶概述 | 第18-21页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第18-19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的酶活测定方法 | 第19-20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第20-21页 |
| ·6-磷酸-β-葡萄糖苷酶简介 | 第21页 |
| ·本论文的目的及意义 | 第21-24页 |
| 第二章 造纸黑液废水菌群宏基因组文库的构建和筛选 | 第24-36页 |
| ·材料与方法 | 第24-27页 |
| ·造纸黑液废水样品 | 第24页 |
| ·菌株及质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第25页 |
| ·主要仪器及生化试剂 | 第25-26页 |
| ·造纸黑液废水菌群基因组总DNA的大量提取 | 第26页 |
| ·造纸黑液废水菌群宏基因组文库的构建与筛选 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-34页 |
| ·造纸黑液废水菌群基因组总DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的筛选 | 第28-29页 |
| ·菌株25-217基因片段序列分析 | 第29-34页 |
| ·本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 6-磷酸-β-葡萄糖苷酶基因pbgl25-217的克隆与表达 | 第36-48页 |
| ·材料与方法 | 第36-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第36-37页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第37页 |
| ·主要仪器及生化试剂 | 第37页 |
| ·E.coli DH5α和E.coli Rosetta感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·基因片段pbgl25-217的克隆 | 第38-39页 |
| ·基因片段pbgl25-217的表达 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-47页 |
| ·基因片段pbgl25-217的克隆 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pbgl25-217-pETDuet的构建及验证 | 第42-45页 |
| ·Pbgl25-217的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·pNP标准曲线的测定结果 | 第46-47页 |
| ·Pbgl25-217酶活性的检测 | 第47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 6-磷酸-β-葡萄糖苷酶Pbgl25-217的纯化与酶学性质研究 | 第48-60页 |
| ·材料与方法 | 第48-52页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第48-49页 |
| ·主要仪器及生化试剂 | 第49页 |
| ·Pbgl25-217最佳诱导表达条件的确定 | 第49-50页 |
| ·Pbgl25-217的纯化 | 第50页 |
| ·Pbgl25-217的基本酶学性质研究 | 第50-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-58页 |
| ·Pbgl25-217的最适诱导表达条件 | 第52-54页 |
| ·Pbgl25-217的纯化结果 | 第54-55页 |
| ·Pbgl25-217的基本酶学性质 | 第55-58页 |
| ·本章小结 | 第58-60页 |
| 第五章 6-磷酸-β-葡萄糖苷酶Pbgl25-217的定点突变 | 第60-74页 |
| ·材料与方法 | 第60-66页 |
| ·菌株 | 第60-61页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第61页 |
| ·主要仪器及生化试剂 | 第61-62页 |
| ·引物设计 | 第62页 |
| ·基因片段pbgl25-217定点突变预处理 | 第62-63页 |
| ·基因片段pbgl25-217的定点突变 | 第63-64页 |
| ·pbgl25-217定点突变基因片段的表达 | 第64-66页 |
| ·E179A等突变蛋白与Pbgl25-217动力学常数的比较 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·Pbgl25-217关键催化位点分析 | 第66-67页 |
| ·基因片段Pbgl25-217的定点突变 | 第67-69页 |
| ·重组质粒E179A-pETDuet等的构建及验证 | 第69-70页 |
| ·E179A等突变蛋白的诱导表达 | 第70-71页 |
| ·各突变蛋白与Pbgl25-217动力学常数的比较 | 第71-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第85页 |
