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辣椒与黄瓜抗疫病相关基因克隆及分析

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一章 文献综述第14-34页
   ·茄科植物抗病基因研究进展第14-26页
     ·茄科植物 R 蛋白的结构与功能第14-19页
     ·茄科植物 R 基因的进化第19-22页
     ·茄科植物 R 基因的比较基因组学研究第22-23页
     ·R 基因介导的植物抗病反应第23-26页
   ·差异表达基因筛选技术第26-28页
     ·mRNA 差异显示技术第26页
     ·抑制消减杂交技术(SSH)第26页
     ·cDNA 微阵列第26-27页
     ·cDNA-AFLP 技术第27-28页
   ·辣椒疫病研究进展第28-32页
     ·辣椒疫霉菌第28-29页
     ·辣椒疫病抗性研究进展第29-32页
     ·辣椒抗疫病相关基因研究第32页
   ·本研究的内容、目的和意义第32-34页
第二章 辣椒 NBS 类抗病基因同源序列分析第34-46页
   ·材料与处理第34-35页
   ·实验方法第35-37页
     ·引物设计第35页
     ·辣椒总 RNA 提取第35页
     ·cDNA 第一链合成第35页
     ·RT-PCR 扩增第35-36页
     ·PCR 产物回收、克隆及测序第36页
     ·NCBI 数据库辣椒 NBS 类 RGAs 的获得第36页
     ·序列分析第36-37页
   ·结果与分析第37-43页
     ·辣椒 NBS 类 RGAs 的克隆第37-38页
     ·辣椒 NBS 类 RGAs 氨基酸序列比对及系统发育分析第38-42页
     ·重组及选择压力分析第42-43页
   ·讨论第43-46页
     ·同源序列法克隆 RGA第43-44页
     ·辣椒 RGAs 的应用第44-46页
第三章 辣椒 Rpi-blb1 类同源基因克隆及分析第46-61页
   ·实验材料第46页
   ·实验方法第46-50页
     ·DNA 提取第46页
     ·RNA 提取第46页
     ·反转录第46页
     ·RACE-PCR 与 TAIL-PCR 扩增第46-48页
     ·辣椒 Rpi-blb1 类同源基因的半定量表达分析第48-49页
     ·生物信息学分析第49-50页
   ·结果与分析第50-59页
     ·辣椒基因 Rpi-blb1 类同源基因全长的获得与序列分析第50-53页
     ·半定量分析第53页
     ·Rpi-blb1 同源基因在茄科植物中的进化分析第53-59页
   ·讨论第59-61页
     ·TAIL-PCR 结合 RACE 获得全长基因第59页
     ·Rpi-blb1 同源基因的进化第59-60页
     ·辣椒 Rpi-blb1 同源基因的功能第60-61页
第四章 利用 cDNA-AFLP 技术分离辣椒抗疫病相关基因第61-69页
   ·材料及处理第61页
   ·方法第61-64页
     ·RNA 提取及双链 cDNA 合成第61-62页
     ·酶切、连接、预扩增及选择性扩增(刘珂珂 2009)第62-64页
   ·结果与分析第64-67页
     ·酶切-连接、预扩增第64页
     ·选择性扩增产物的检测第64页
     ·差异片段的回收、克隆及测序第64-65页
     ·差异片段分析第65-67页
   ·讨论第67-69页
     ·信号转导第67页
     ·防卫反应第67-68页
     ·代谢第68-69页
第五章 辣椒几个抗病相关基因全长的克隆及表达分析第69-77页
   ·材料及处理第69页
   ·方法第69-70页
     ·基因全长的获得第69-70页
     ·序列分析第70页
     ·表达分析第70页
   ·结果与分析第70-75页
     ·PCR 扩增结果第70-71页
     ·基因全长的获得及生物信息学分析第71-74页
     ·疫霉菌侵染下各基因的表达模式分析第74-75页
   ·讨论第75-77页
第六章 辣椒脂氧合酶基因克隆及表达分析第77-88页
   ·材料及处理第78页
   ·实验方法第78-79页
     ·总 RNA 的提取与 cDNA 合成第78页
     ·CaLOX2 和 CaLOX3 基因的全长 cDNA 克隆及序列分析第78-79页
     ·定量分析第79页
   ·结果与分析第79-85页
     ·CaLOX2、CaLOX3 基因克隆及序列分析第79-80页
     ·基因系统进化分析第80-82页
     ·基因的表达研究第82-85页
   ·讨论第85-88页
     ·CaLOX2 基因编码蛋白的细胞定位第85页
     ·植物 LOX 基因表达具有组织特异性第85-86页
     ·CaLOX2 和 CaLOX3 基因在不同诱导条件下的表达差异第86页
     ·CaLOX2 基因可能参与茉莉酸合成第86-87页
     ·CaLOX2 基因同时受 JA 和 SA 诱导表达第87-88页
第七章 利用病毒诱导的基因沉默研究辣椒几个抗病相关基因的功能第88-95页
   ·材料第88-89页
     ·辣椒材料第88-89页
     ·载体及菌株第89页
   ·方法第89-90页
     ·引物设计第89页
     ·载体构建第89页
     ·辣椒幼苗培养及接种第89-90页
     ·沉默效率检测第90页
   ·结果与分析第90-93页
     ·病毒抑制载体的构建第90-91页
     ·不同辣椒材料沉默 PDS 基因后表现第91页
     ·沉默效率检测第91-92页
     ·疫霉菌接种后表型观察第92-93页
   ·讨论第93-95页
第八章 黄瓜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因 CsPGIP 克隆与分析第95-108页
   ·材料第95-96页
   ·方法第96-98页
     ·疫霉菌接种及水杨酸诱导处理第96页
     ·PCR 扩增黄瓜 PGIP 基因 mRNA 序列及 DNA 序列第96页
     ·PGIP 基因序列分析第96-97页
     ·PGIP 启动子调控元件分析第97页
     ·实时定量 PCR 分析第97页
     ·PGIP 基因原核表达及对疫霉菌 PG 抑制作用第97-98页
   ·结果与分析第98-106页
     ·CsPGIP 基因克隆及序列分析第98页
     ·CsPGIP 基因的系统进化分析第98-100页
     ·CsPGIP 基因的启动子调控元件分析第100-102页
     ·CsPGIP 基因的表达分析第102-104页
     ·CsPGIP 基因原核表达第104-105页
     ·CsPGIP 蛋白对疫霉菌 PG 抑制作用第105-106页
   ·讨论第106-108页
第九章 全文结论及创新点第108-110页
   ·全文结论第108-109页
   ·创新点第109-110页
参考文献第110-125页
附录第125-129页
缩略词第129-130页
致谢第130-131页
作者简介第131页

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