| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-50页 |
| ·昆虫杆状病毒表达载体系统（BEVS） | 第18-20页 |
| ·概述 | 第18页 |
| ·昆虫杆状病毒载体和外源基因表达 | 第18-19页 |
| ·适于 BEVS 的昆虫细胞系 | 第19-20页 |
| ·有机磷和拟除虫菊酯杀虫剂生物化学 | 第20-26页 |
| ·有机磷杀虫剂 | 第20-23页 |
| ·概述 | 第20-21页 |
| ·有机磷杀虫剂作用机理 | 第21页 |
| ·有机磷杀虫剂的代谢 | 第21-23页 |
| ·拟除虫菊酯类杀虫剂 | 第23-26页 |
| ·天然除虫菊素 | 第23页 |
| ·合成除虫菊酯类杀虫剂 | 第23-25页 |
| ·拟除虫菊酯作用机理 | 第25页 |
| ·拟除虫菊酯的代谢 | 第25-26页 |
| ·昆虫抗药性研究进展 | 第26-47页 |
| ·昆虫靶标抗性 | 第27-29页 |
| ·乙酰胆碱酯酶突变抗性 | 第27页 |
| ·钠离子通道突变抗性 | 第27-29页 |
| ·γ-氨基丁酸受体突变抗性 | 第29页 |
| ·昆虫代谢抗性 | 第29-47页 |
| ·细胞色素 P450介导的代谢抗性 | 第29-32页 |
| ·谷胱甘肽 S 转移酶介导的农药代谢抗性 | 第32-33页 |
| ·羧酸酯酶介导的代谢抗性 | 第33-38页 |
| ·昆虫羧酸酯酶对杀虫剂代谢抗性的分子机制 | 第38-41页 |
| ·昆虫羧酸酯酶介导的代谢抗性研究进展 | 第41-45页 |
| ·昆虫羧酸酯酶对有机磷和拟除虫菊酯的解毒活性 | 第45-47页 |
| ·问题的提出及论文设计思路、研究目的 | 第47-50页 |
| 第二章 棉铃虫羧酸酯酶基因在杆状病毒表达载体系统中的表达 | 第50-75页 |
| ·材料和方法 | 第50-60页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·棉铃虫羧酸酯酶基因 | 第50-51页 |
| ·载体及昆虫细胞系 | 第51页 |
| ·试剂及仪器 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-60页 |
| ·酯酶氨基酸序列比对及分析 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51-53页 |
| ·PCR 反应 | 第53页 |
| ·琼脂糖电泳和 attb-PCR 产物回收纯化 | 第53页 |
| ·BP 反应 | 第53-54页 |
| ·转化 | 第54页 |
| ·质粒提取及测序 | 第54-55页 |
| ·昆虫细胞培养 | 第55页 |
| ·LR 反应及转染 | 第55-56页 |
| ·高效价重组病毒液制备 | 第56-57页 |
| ·荧光定量 PCR 测定重组病毒液的效价 | 第57-58页 |
| ·细胞收集及酯酶裂解液制备 | 第58-59页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-PAGE）及染色 | 第59页 |
| ·酯酶对α-乙酸萘酯和 4-硝基苯基乙酸酯的酶促动力学测定 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-73页 |
| ·酯酶氨基酸序列比对和序列特征分析 | 第60-61页 |
| ·重组病毒效价 | 第61-65页 |
| ·酯酶表达产物电泳图谱分析 | 第65-69页 |
| ·酯酶对α-乙酸萘酯和 4-硝基苯基乙酸酯的酶促水解活性 | 第69-73页 |
| ·小结与讨论 | 第73-75页 |
| ·小结 | 第73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| 第三章 棉铃虫羧酸酯酶对有机磷的解毒作用 | 第75-85页 |
| ·材料和方法 | 第75-80页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76-80页 |
| ·荧光法测定原理 | 第76-78页 |
| ·酯酶浓度的测定 | 第78-79页 |
| ·酯酶对 2 种有机磷底物酶促水解活性的测定 | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-83页 |
| ·表达产物中酯酶浓度分析 | 第80页 |
| ·酯酶对有机磷农药的酶促水解作用 | 第80-83页 |
| ·小结与讨论 | 第83-85页 |
| ·小结 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 第四章 棉铃虫羧酸酯酶对氰戊菊酯及氯氰菊酯的解毒作用 | 第85-97页 |
| ·材料和方法 | 第85-90页 |
| ·材料 | 第85-87页 |
| ·氰戊菊酯及氯氰菊酯立体异构体 | 第85-86页 |
| ·氰戊菊酯及氯氰菊酯立体异构体类似物 | 第86-87页 |
| ·仪器 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-90页 |
| ·荧光法测定酯酶对氰戊菊酯和氯氰菊酯类似物的水解活性 | 第87-89页 |
| ·高效液相色谱法测定酯酶对氰戊菊酯和氯氰菊酯异构体水解活性 | 第89-90页 |
| ·结果与分析 | 第90-94页 |
| ·酯酶对氰戊菊酯 4 种异构体类似物的酶促水解活性 | 第90页 |
| ·酯酶对顺式氰戊菊酯 2(S)-α(S)的解毒活性 | 第90页 |
| ·酯酶对氯氰菊酯的 8 种异构体类似物的酶促水解活性 | 第90-91页 |
| ·酯酶对氯氰菊酯 8 种异构体的解毒活性 | 第91-94页 |
| ·小结与讨论 | 第94-97页 |
| ·小结 | 第94页 |
| ·讨论 | 第94-97页 |
| 第五章 羧酸酯酶突变体的构建及对有机磷的解毒作用 | 第97-117页 |
| ·材料与方法 | 第97-103页 |
| ·材料 | 第97-98页 |
| ·酯酶基因及突变试剂盒 | 第97页 |
| ·仪器 | 第97-98页 |
| ·方法 | 第98-103页 |
| ·酯酶氧阴离子洞和酰基化口袋突变位点确定 | 第98-101页 |
| ·突变引物设计 | 第101页 |
| ·氨基酸定点突变 | 第101页 |
| ·Dpn I 内切核酸酶消化 | 第101-102页 |
| ·转化及突变序列验证 | 第102页 |
| ·双位点氨基酸突变 | 第102页 |
| ·在昆虫杆状病毒载体表达系统中的表达 | 第102-103页 |
| ·突变体对α-乙酸萘酯和 4-硝基苯基乙酸酯的酶促水解活性测定 | 第103页 |
| ·突变体对有机磷农药的代谢解毒活性测定 | 第103页 |
| ·结果分析 | 第103-112页 |
| ·突变体重组病毒的效价 | 第103-104页 |
| ·突变酯酶的电泳图谱特征分析 | 第104-105页 |
| ·酯酶氨基酸突变体对α-乙酸萘酯的酶促水解作用 | 第105-106页 |
| ·酯酶氧阴离子洞突变 | 第105页 |
| ·酯酶酰基化口袋突变 | 第105-106页 |
| ·酯酶双位点突变 | 第106页 |
| ·酯酶突变体对 4-硝基苯基乙酸酯酶促水解作用 | 第106-108页 |
| ·酯酶氧阴离子洞突变 | 第106-108页 |
| ·酯酶酰基化口袋突变 | 第108页 |
| ·酯酶双位点突变 | 第108页 |
| ·酯酶突变体对有机磷杀虫剂的代谢解毒作用 | 第108-112页 |
| ·酯酶氧阴离子洞突变 | 第108-110页 |
| ·酯酶酰基化口袋突变 | 第110-112页 |
| ·酯酶双位点突变 | 第112页 |
| ·小结与讨论 | 第112-117页 |
| ·小结 | 第112-113页 |
| ·讨论 | 第113-117页 |
| 第六章 羧酸酯酶突变体对拟除虫菊酯的解毒作用 | 第117-125页 |
| ·材料和方法 | 第117页 |
| ·结果分析 | 第117-122页 |
| ·酯酶突变体对氰戊菊酯 4 种异构体类似物的酶促水解活性 | 第117-118页 |
| ·酯酶突变体对顺式氰戊菊酯异构体 2(S)-α(S) 的代谢解毒活性 | 第118页 |
| ·酯酶突变体对氯氰菊酯的 8 种异构体类似物的酶促水解活性 | 第118-119页 |
| ·酯酶突变体对氯氰菊酯 8 种异构体的代谢作用 | 第119-122页 |
| ·酯酶氧阴离子洞突变 | 第119页 |
| ·酯酶酰基化口袋突变 | 第119页 |
| ·酯酶双位点突变 | 第119-122页 |
| ·棉铃虫与铜绿蝇酯酶突变体对拟除虫菊酯代谢作用的比较 | 第122页 |
| ·小结与讨论 | 第122-125页 |
| ·小结 | 第122-123页 |
| ·讨论 | 第123-125页 |
| 第七章 羧酸酯酶解毒酶工程菌构建 | 第125-132页 |
| ·材料和方法 | 第125-128页 |
| ·材料 | 第125页 |
| ·方法 | 第125-128页 |
| ·引物设计 | 第125-126页 |
| ·PCR 扩增及产物纯化 | 第126页 |
| ·酶切和连接 | 第126页 |
| ·转化和测序 | 第126-127页 |
| ·解毒酶重组菌 Ecoli. BL21 的表达 | 第127页 |
| ·菌体裂解和表达产物制备 | 第127页 |
| ·表达产物中酯酶检测 | 第127-128页 |
| ·结果分析 | 第128-131页 |
| ·不含信号肽序列的酯酶基因 PCR 扩增结果及序列测定结果 | 第128-130页 |
| ·不同表达条件下解毒酶工程菌表达结果 | 第130-131页 |
| ·小结与讨论 | 第131-132页 |
| 第八章 全文总结 | 第132-137页 |
| ·主要结论 | 第132-133页 |
| ·论文创新点 | 第133页 |
| ·讨论 | 第133-136页 |
| ·下一步研究工作 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-151页 |
| 图和表索引 | 第151-153页 |
| 附录 | 第153-156页 |
| 缩略语 | 第156-158页 |
| 致谢 | 第158-159页 |
| 作者简介 | 第159页 |
