| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| ·致病真菌与常用抗真菌药物 | 第10-12页 |
| ·真菌耐药性产生机制 | 第12-14页 |
| ·酿酒酵母与真菌感染 | 第14-18页 |
| ·ABC转运蛋白 | 第18-22页 |
| 第2章 YJM789氟康唑敏感性的遗传定位 | 第22-32页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-23页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·YPD培养基 | 第22-23页 |
| ·液体培养基中的药物敏感性实验 | 第23页 |
| ·氟康唑抗性基因的遗传定位 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-28页 |
| ·YJM789菌株对氟康唑表现出高度的敏感性 | 第23-24页 |
| ·氟康唑抗性表型相关基因的遗传定位 | 第24-26页 |
| ·多种致病酿酒酵母菌株中存在变异的PDR5基因 | 第26-27页 |
| ·YJM789 PDR5基因序列存在巨大变异 | 第27-28页 |
| ·讨论与小结 | 第28-32页 |
| 第3章 PDR5突变对YJM789药物敏感性的影响 | 第32-72页 |
| ·引言 | 第32-33页 |
| ·材料与方法 | 第33-49页 |
| ·菌株、质粒、主要仪器与设备 | 第33-34页 |
| ·储备溶液与培养基 | 第34-35页 |
| ·基本分子生物学实验技术 | 第35页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·酿酒酵母Total RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·酿酒酵母细胞的高效转化 | 第37-38页 |
| ·PDR5-GFP融合基因的表达菌株的构建 | 第38-40页 |
| ·酿酒酵母细胞总蛋白的提取 | 第40-41页 |
| ·免疫印渍杂交 | 第41-43页 |
| ·BY4741 PDR5基因及其上下游调控序列的敲除 | 第43-44页 |
| ·PDR5表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·固体平板培养基中的药物敏感性实验 | 第46页 |
| ·BY4741 PDR5基因敲除菌株的构建 | 第46-47页 |
| ·YJM789 URA3基因敲除菌株的构建 | 第47-48页 |
| ·替换YJM789 PDR5为BY4741 PDR5 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-65页 |
| ·PDR5-GFP融合基因在YJM789中表达 | 第49-50页 |
| ·YJM789中PDR5基因正常表达并定位于细胞膜 | 第50-52页 |
| ·YJM789中PDR5基因表达水平有所下降 | 第52-53页 |
| ·过表达的YJM789 PDR5的不能提高细胞的耐药性 | 第53-56页 |
| ·野生型YJM789菌株对不同唑类药物高度敏感 | 第56-59页 |
| ·PDR5基因敲除对细胞唑类药物抗性的影响 | 第59-60页 |
| ·功能正常的Pdr5p能提高YJM789的氟康唑耐受能力 | 第60-62页 |
| ·敲除YJM789的PDR5基因不会影响细胞对氟康唑的敏感性 | 第62-63页 |
| ·YJM789 PDR5基因敲除菌株获得对两性霉素B的抗性 | 第63-65页 |
| ·讨论 | 第65-69页 |
| ·本章小结 | 第69-72页 |
| 第4章 突变位点影响Pdr5p的分子机制 | 第72-104页 |
| ·引言 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-84页 |
| ·培养基与药物敏感性实验 | 第73页 |
| ·PDR5嵌合表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·多变突变技术构建嵌合表达载体 | 第75-78页 |
| ·定点突变技术构建嵌合表达载体 | 第78-79页 |
| ·酿酒酵母细胞膜提取 | 第79-81页 |
| ·蛋白含量测定 | 第81页 |
| ·考马斯染色 | 第81页 |
| ·ATPase活性测定 | 第81-83页 |
| ·罗丹明6G转运能力的流式细胞分析 | 第83-84页 |
| ·结果 | 第84-98页 |
| ·YJM789 Pdr5p在跨膜结构域内的氨基酸存在显著变化 | 第84-85页 |
| ·影响YJM789 Pdr5p功能的氨基酸突变定位 | 第85-92页 |
| ·Pdr5pA1352M突变体的表达与亚细胞定位 | 第92-93页 |
| ·位于Pdr5p 1352位点的突变对蛋白功能的影响 | 第93-95页 |
| ·Pdr5pA1352M突变体对常用抗菌药的敏感性 | 第95-96页 |
| ·A1352M突变对Pdr5p罗丹明6G转运能力的影响 | 第96-97页 |
| ·A1352M突变对Pdr5p的ATPase活性影响 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98-101页 |
| ·本章小结 | 第101-104页 |
| 第5章 结论与展望 | 第104-106页 |
| 附录 | 第106-110页 |
| 参考文献 | 第110-120页 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
