家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因BmGSTz2和BmGSTd3的克隆和表达
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第一部分 综述 | 第14-24页 |
| 1 文献综述 | 第14-21页 |
| ·昆虫谷胱甘肽-S-转移酶的研究进展 | 第14-20页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶的分类与命名 | 第14-15页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶的结构与功能 | 第15-16页 |
| ·昆虫谷胱甘肽-S-转移酶的分布与诱导 | 第16-17页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶在昆虫抗药性形成中的作用 | 第17-19页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶参与抗药性形成的机制 | 第19页 |
| ·谷胱甘肽-S-转移酶的调控机理 | 第19-20页 |
| ·家蚕谷胱甘肽-S-转移酶研究现状 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-24页 |
| ·研究背景和研究意义 | 第21-22页 |
| ·研究的主要内容 | 第22页 |
| ·研究思路和技术路线 | 第22-24页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第24-38页 |
| 1 实验材料 | 第24-27页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-38页 |
| ·RNA提取 | 第27-28页 |
| ·RNA的抽提 | 第27页 |
| ·RNA的检测 | 第27-28页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第28页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3基因的克隆 | 第28-32页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·目的基因片段的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·目的基因片段PCR产物的纯化回收 | 第29-30页 |
| ·目的基因片段与克隆载体的连接 | 第30页 |
| ·感受态细胞的制备与检测 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的筛选和验证 | 第31-32页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3的表达模式分析 | 第32-33页 |
| ·组织表达谱分析 | 第32页 |
| ·应激表达模式分析 | 第32-33页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3的序列分析 | 第33-34页 |
| ·基因结构及转录调控元件分析 | 第33页 |
| ·系统发生分析 | 第33页 |
| ·基因含有大肠杆菌稀有密码子分析 | 第33页 |
| ·蛋白质理化性质及结构预测 | 第33-34页 |
| ·BmGSTz2基因的原核表达 | 第34-38页 |
| ·菌株活化和质粒提取 | 第34页 |
| ·表达载体和目的片段双酶切 | 第34页 |
| ·酶切产物回收与连接 | 第34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·目的基因诱导表达 | 第35页 |
| ·蛋白样品SDS-PAGE电泳 | 第35-38页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第38-60页 |
| 1 BmGSTz2和BmGSTd3基因的克隆 | 第38-42页 |
| ·基因预测 | 第38-39页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3基因的扩增 | 第39页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3的克隆和鉴定 | 第39-42页 |
| 2 BmGSTz2和BmGSTd3的表达模式分析 | 第42-44页 |
| ·组织表达谱分析 | 第42-43页 |
| ·应激表达模式分析 | 第43-44页 |
| 3 BmGSTz2和BmGSTd3的序列分析 | 第44-52页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3基因结构分析 | 第44页 |
| ·转录调控元件 | 第44-47页 |
| ·序列相似性与系统发生分析 | 第47-48页 |
| ·基因含有大肠杆菌稀有密码子分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白质理化性质及二级结构预测 | 第49-52页 |
| ·蛋白质理化性质预测 | 第49-50页 |
| ·BmGSTZ2与BmGSTD3的二级结构预测 | 第50-52页 |
| 4 BmGSTz2基因的原核表达 | 第52-55页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第52-54页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-58页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3的表达模式与调控 | 第55-56页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3的表达模式 | 第55页 |
| ·BmGSTz2和BmGSTd3的调控 | 第55-56页 |
| ·序列相似性及系统发生分析 | 第56-57页 |
| ·序列相似性分析 | 第56页 |
| ·系统发生分析 | 第56-57页 |
| ·BmGSTz2的原核表达影响因素分析 | 第57-58页 |
| ·N-端原则 | 第57-58页 |
| ·稀有密码子 | 第58页 |
| ·mRNA转录产物的二级结构的影响 | 第58页 |
| ·温度影响 | 第58页 |
| 6 小结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
