| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-38页 |
| 1. 菌寄生真菌与菌寄生作用的研究进展 | 第11-20页 |
| ·菌寄生真菌的类型及其寄生性 | 第11-12页 |
| ·菌寄生真菌和寄主之间的相互识别 | 第12-15页 |
| ·相互识别机制 | 第12-14页 |
| ·识别信号的传导 | 第14-15页 |
| ·菌寄生真菌和寄主之间识别后的相互作用 | 第15-19页 |
| ·菌寄生真菌和寄主之间相互作用中二者的形态变化及生理反应 | 第15-16页 |
| ·菌寄生真菌和寄主之间相互作用的分子调控 | 第16-17页 |
| ·菌寄生真菌和寄主之间相互作用产生的水解酶 | 第17-19页 |
| ·菌寄生真菌研究展望 | 第19-20页 |
| 2 蛋白酶的研究进展 | 第20-26页 |
| ·蛋白酶的分类 | 第20-21页 |
| ·蛋白酶的生理功能 | 第21-22页 |
| ·微生物蛋白酶基因的克隆表达情况 | 第22-26页 |
| 3. 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第26-36页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第27-28页 |
| ·常用表达载体 | 第28-32页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第32-35页 |
| ·外源蛋白在酵母中表达的一般步骤 | 第32页 |
| ·毕赤酵母的转化方法 | 第32页 |
| ·外源基因的整合方式 | 第32-34页 |
| ·表达产物的翻译后加工与修饰 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母表达的缺陷和对策 | 第35-36页 |
| 4 本研究的立题依据研究内容及意义 | 第36-38页 |
| ·目的意义 | 第36-37页 |
| ·研究内容 | 第37页 |
| ·技术路线 | 第37-38页 |
| 第二章 纤细齿梗孢蛋白酶基因cDNA 序列的克隆及其序列分析 | 第38-73页 |
| 1. 材料和方法 | 第38-54页 |
| ·实验材料 | 第38-41页 |
| ·供试菌株 | 第38-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·酶和生化试剂 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·溶液配制 | 第39-40页 |
| ·使用的PCR 引物 | 第40-41页 |
| ·试验方法 | 第41-54页 |
| ·总RNA 的提取( Trizol 法) | 第41-42页 |
| ·紫外检测RNA 产率和纯度 | 第42页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第42-43页 |
| ·目的基因cDNA 中间片段的分离 | 第43-48页 |
| ·目的基因3’末端的分离（3’-RACE） | 第48-49页 |
| ·目的基因5’末端的分离（5’-RACE） | 第49-54页 |
| ·目的基因全长 cDNA 的克隆 | 第54页 |
| ·全长序列的生物信息学分析 | 第54页 |
| 2. 结果与分析 | 第54-70页 |
| ·兼并引物的设计 | 第54-55页 |
| ·菌寄生真菌总 RNA 的提取 | 第55页 |
| ·纤细齿梗孢蛋白酶中间片段的分离 | 第55-60页 |
| ·Olpitrichum tenellum 蛋白酶基因3’-末端cDNA 的分离 | 第60页 |
| ·Olpitrichum tenellum 蛋白酶基因5’-末端cDNA 的分离 | 第60-62页 |
| ·Olpitrichum tenellum蛋白酶基因全长cDNA的分离及扩增片段的序列拼接 | 第62-63页 |
| ·蛋白酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第63-70页 |
| ·纤细齿梗孢蛋白酶编码基因的cDNA 序列分析 | 第64-65页 |
| ·蛋白酶基因mpprp 的氨基酸序列分析 | 第65-66页 |
| ·蛋白酶基因mppro 的结构域分析 | 第66-67页 |
| ·蛋白酶转运分析 | 第67-68页 |
| ·蛋白酶基因mppro 结构及加工后的修饰分析 | 第68-70页 |
| ·蛋白酶基因mppro 相似性分析 | 第70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| ·纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum 总RNA 的提取 | 第70-71页 |
| ·纤细齿梗孢蛋白酶基因的结构特点 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第三章 Olpitrichum tenellum 蛋白酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达 | 第73-110页 |
| 1. 材料和方法 | 第74-87页 |
| ·材料 | 第74-76页 |
| ·菌株和质粒 | 第74页 |
| ·酶和生化试剂 | 第74页 |
| ·培养基及有关溶液的配制 | 第74-76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76页 |
| ·试验方法 | 第76-87页 |
| ·蛋白酶前肽及成熟肽基因序列的分离 | 第76-77页 |
| ·蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第77-78页 |
| ·蛋白酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第78-87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-108页 |
| ·蛋白酶mppro 表达基因序列的限制性酶切位点分析结果 | 第87-88页 |
| ·表达序列的获得 | 第88-89页 |
| ·纤细齿梗孢蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第89-94页 |
| ·蛋白酶基因原核表达载体的构建 | 第89-91页 |
| ·蛋白酶基因原核表达菌株BL21-mppro 的构建 | 第91-92页 |
| ·蛋白酶基因的原核诱导表达 | 第92-93页 |
| ·原核表达的蛋白酶活性测定 | 第93-94页 |
| ·纤细齿梗孢蛋白酶基因mppro 在毕赤酵母中的表达 | 第94-108页 |
| ·酵母表达载体的构建和鉴定 | 第94-99页 |
| ·pPIC9K | 第99-104页 |
| ·表达蛋白酶的纯化 | 第104-106页 |
| ·表达蛋白酶酶学性质的研究 | 第106-107页 |
| ·表达蛋白酶的遗传稳定性的研究 | 第107-108页 |
| 3. 讨论 | 第108-110页 |
| ·关于纤细齿梗孢蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第108页 |
| ·关于本研究线性化表达载体线性化所用的酶 | 第108页 |
| ·毕赤酵母自身分泌的蛋白酶对本研究表达的影响及消除措施 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-110页 |
| 第五章 全文总结和展望 | 第110-111页 |
| 1. 全文总结 | 第110页 |
| 2. 展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
