| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词中英文对照 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 一、Argonaute家族蛋白的发现 | 第15页 |
| 二、Argonaute家族蛋白的特征 | 第15-18页 |
| 三、Argonaute蛋白家族分类 | 第18页 |
| 四、Ago亚家族蛋白与非编码小RNA | 第18-21页 |
| 五、Ago亚家族蛋白的功能 | 第21-22页 |
| 六、Piwi亚家族蛋白的发现 | 第22页 |
| 七、Piwi亚家族蛋白与非编码小RNA | 第22-25页 |
| 八、Piwi亚家族蛋白的功能 | 第25-26页 |
| 九 本研究目的及意义 | 第26-29页 |
| 第二章 家蚕Piwi亚家族蛋白基因克隆与转录本分析 | 第29-47页 |
| 1 材料与方法 | 第29-38页 |
| ·供试昆虫的饲养 | 第29页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·家蚕中Piwi亚家族的预测 | 第30-31页 |
| ·总RNA的提取及定量检测 | 第31-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·总RNA的定量检测 | 第32页 |
| ·cDNA的合成 | 第32页 |
| ·RACE cDNA的合成 | 第32-34页 |
| ·5'-RACE cDNA的合成 | 第32-33页 |
| ·3'-RACE cDNA的合成 | 第33-34页 |
| ·PCR引物 | 第34页 |
| ·PCR反应 | 第34-36页 |
| ·普通PCR反应体系及条件 | 第35页 |
| ·RACE反应体系及条件 | 第35-36页 |
| ·PCR产物回收 | 第36页 |
| ·连接反应 | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的提取 | 第37页 |
| ·酶切检测 | 第37-38页 |
| ·序列测定与分析 | 第38页 |
| ·基因结构、保守结构域和motif分析 | 第38页 |
| ·进化分析 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-45页 |
| ·家蚕Piwi亚家族蛋白的预测 | 第38-39页 |
| ·家蚕两个Piwi亚家族蛋白的克隆 | 第39-42页 |
| ·家蚕Piwi亚家族蛋白siwi1的特征分析 | 第42-44页 |
| ·家蚕两个Piwi亚家族蛋白的进化分析 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 家蚕Piwi亚家族蛋白表达谱分析 | 第47-59页 |
| 1. 材料与方法 | 第48-52页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·定量用模板的准备 | 第48-49页 |
| ·家蚕各个龄期总RNA提取 | 第48页 |
| ·家蚕六个不同组织总RNA提取 | 第48-49页 |
| ·家蚕各样本cDNA合成 | 第49页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·持家基因检测模板质量 | 第50页 |
| ·普通PCR反应 | 第50-51页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第51-52页 |
| ·引物二聚体检测 | 第51页 |
| ·引物引物扩增效率检测 | 第51-52页 |
| ·利用实时荧光定量PCR分析Piwi亚家族蛋白的表达谱 | 第52页 |
| ·PCR引物 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-56页 |
| ·模板质量检测 | 第53页 |
| ·普通PCR检测siwi1和siwi2在各个组织中的表达 | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量PCR检测siwi1和siwi2在各个组织中的表达 | 第54-55页 |
| ·实时荧光定量PCR检测Siwi1和Siwi2在家蚕各个发育阶段的表达 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 蜜蜂Piwi亚家族蛋白基因克隆与转录本分析 | 第59-73页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| ·供试昆虫 | 第60页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60页 |
| ·总RNA的提取及定量检测 | 第60页 |
| ·cDNA的合成 | 第60页 |
| ·RACE cDNA的合成 | 第60-61页 |
| ·5'-RACE cDNA的合成 | 第60页 |
| ·3'-RACE cDNA的合成 | 第60-61页 |
| ·PCR引物 | 第61-62页 |
| ·PCR反应 | 第62-63页 |
| ·普通PCR反应体系及条件 | 第62页 |
| ·RACE反应体系及条件 | 第62-63页 |
| ·5' end-3' end PCR反应体系及条件 | 第63页 |
| ·PCR产物回收 | 第63页 |
| ·连接反应 | 第63页 |
| ·连接产物的转化 | 第63页 |
| ·重组质粒的提取 | 第63页 |
| ·酶切检测 | 第63-64页 |
| ·序列测定与分析 | 第64页 |
| ·基因结构和保守结构域分析 | 第64页 |
| ·进化分析 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| ·意大利蜜蜂中两个预测的Piwi亚家族基因的分子克隆 | 第65-68页 |
| ·意大利蜜蜂两个Piwi亚家族基因的特征分析 | 第68-69页 |
| ·意大利蜜蜂两个Piwi亚家族蛋白的进化分析 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-73页 |
| 第五章 蜜蜂Piwi亚家族蛋白表达谱分析 | 第73-81页 |
| 1. 材料与方法 | 第74-75页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第74页 |
| ·定量用模板的准备 | 第74页 |
| ·工蜂、蜂王及雄蜂总RNA的提取与检测 | 第74页 |
| ·喂食不同营养物质雌蜂各发育阶段总RNA的提取与检测 | 第74页 |
| ·各样本cDNA合成 | 第74页 |
| ·持家基因检测模板质量 | 第74页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第74-75页 |
| ·引物二聚体检测 | 第75页 |
| ·引物引物扩增效率检测 | 第75页 |
| ·实时荧光定量PCR分析Piwi亚家族蛋白的表达谱 | 第75页 |
| ·PCR引物 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-80页 |
| ·模板质量检测 | 第75-76页 |
| ·蜜蜂两个Piwi亚家族基因在不同蜂型中表达谱分析 | 第76-77页 |
| ·蜜蜂两个Piwi亚家族基因在雌蜂发育阶段的表达谱分析 | 第77-80页 |
| 3 讨论 | 第80-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 附录:攻读硕士学位期间学术论文的发表情况 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
