| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 一、miRNA的发现与进展 | 第11-13页 |
| ·miRNA的加工和运输 | 第11-12页 |
| ·miRNA的研究进展 | 第12-13页 |
| 二、miRNA的结构特征与其在基因组中的位置 | 第13-14页 |
| ·miRNA的结构特征 | 第13页 |
| ·miRNA在基因组中的位置特点 | 第13-14页 |
| 三、miRNA的生物发生过程 | 第14-17页 |
| ·miRNA的转录及其调控 | 第14-15页 |
| ·miRNA的加工和运输 | 第15-17页 |
| 四、miRNA的调控作用机制及其靶标基因的确定 | 第17-20页 |
| ·miRNA对靶标基因的识别 | 第17页 |
| ·miRNA对靶标基因mRNA的调控机制 | 第17-19页 |
| ·miRNA靶标基因的预测 | 第19-20页 |
| ·生物学实验方法寻找和验证miRNA的靶标基因 | 第20页 |
| 五、miRNA的功能 | 第20-22页 |
| 六、昆虫中的miRNA | 第22-23页 |
| 七、本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 果蝇miR-276a和bantam基因启动子活性分析 | 第25-39页 |
| 1 材料与方法 | 第26-34页 |
| ·供试昆虫与细胞培养 | 第26页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第26-27页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR引物 | 第28页 |
| ·PCR反应体系 | 第28-29页 |
| ·常规分子克隆 | 第29-31页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化、单克隆 | 第30页 |
| ·重组质粒的提取及检测 | 第30-31页 |
| ·序列测定与分析 | 第31页 |
| ·pGL3重组载体的构建 | 第31-33页 |
| ·pGL3-basic质粒 | 第31-32页 |
| ·pGL3-basic+promoter重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA转染果蝇S2细胞 | 第33-34页 |
| ·S2细胞荧光素酶活性的检测 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-36页 |
| ·bantam启动子序列在S2细胞内的转录活性分析 | 第34-35页 |
| ·miR-276a启动子序列在果蝇S2细胞内的转录活性分析 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 果蝇S2细胞内Drosha酶被干扰后部分miRNA初始转录本丰度变化分析 | 第39-47页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·总RNA的提取 | 第40页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第40-41页 |
| ·定量PCR引物 | 第41页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系 | 第41-42页 |
| ·果蝇S2细胞RNAi实验 | 第42-44页 |
| ·dsRNA的设计与体外转录合成(由钱进军协助完成) | 第42-44页 |
| ·果蝇S2细胞RNAi | 第44页 |
| ·实时荧光定量PCR检测干扰效果 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| ·Drosha酶被干扰的效果检测 | 第45页 |
| ·RNAi处理后细胞内primary miRNA含量的变化检测 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 S2细胞内Drosha酶被干扰后对部分miRNA靶标基因mRNA含量的影响 | 第47-51页 |
| 1 材料与方法 | 第47-48页 |
| ·引物序列 | 第47-48页 |
| ·miRNA靶标基因预测 | 第48页 |
| 2 实验结果 | 第48-49页 |
| ·miRNA靶标基因的预测(表4-2) | 第48-49页 |
| ·所选miRNA靶标基因mRNA丰度变化的检测 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 全文总结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 附录:攻读硕士学位期间学术论文的发表情况 | 第61-63页 |
| 缩略词中英文对照 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
