| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 引言 | 第10页 |
| 1 河豚毒素研究概况 | 第10-18页 |
| ·河豚毒素的起源与分布 | 第10-14页 |
| ·河豚毒素结构与性质 | 第14-16页 |
| ·河豚毒素的危害 | 第16-17页 |
| ·河豚毒素作用机理 | 第17-18页 |
| 2 河豚毒素检测 | 第18-20页 |
| ·生物检测法 | 第18-19页 |
| ·理化检测法 | 第19-20页 |
| ·免疫学检测法 | 第20页 |
| 3 噬菌体单链抗体库技术 | 第20-23页 |
| ·单链抗体 | 第20-21页 |
| ·噬菌体展示技术的基本原理 | 第21页 |
| ·噬菌体抗体库 | 第21页 |
| ·单链抗体的应用 | 第21-23页 |
| ·靶向药物 | 第21-22页 |
| ·诊断和治疗 | 第22-23页 |
| 第二章 河豚毒素完全抗原制备与动物免疫 | 第23-36页 |
| 引言 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-27页 |
| 1 材料 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-27页 |
| ·完全抗原制备 | 第24页 |
| ·动物免疫 | 第24-25页 |
| ·小鼠血清效价测定 | 第25-27页 |
| 结果与分析 | 第27-34页 |
| 1. 河豚毒素完全抗原的制备 | 第27-28页 |
| 2. 免疫剂量的确定 | 第28-29页 |
| 3. 血清抗体效价测定 | 第29-34页 |
| 讨论 | 第34-35页 |
| 1. 完全抗原的制备 | 第34页 |
| 2. 动物免疫 | 第34-35页 |
| 3. 血清效价测定 | 第35页 |
| 4. 抗体特异性测定 | 第35页 |
| 结论 | 第35-36页 |
| 第三章 噬菌体单链抗体库构建与淘选 | 第36-53页 |
| 引言 | 第36-37页 |
| 材料与方法 | 第37-45页 |
| 1 材料 | 第37-39页 |
| ·宿主菌株 | 第37页 |
| ·质粒载体 | 第37页 |
| ·扩增引物 | 第37-38页 |
| ·试剂与材料 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-45页 |
| ·小鼠脾脏总RNA 的提取 | 第39页 |
| ·RT-PCR 合成cDNA 第一链 | 第39-40页 |
| ·VL 和VH 基因PCR 扩增 | 第40页 |
| ·scFv 基因片段组装与扩增 | 第40-41页 |
| ·scFv DNA 片段的SfiⅠ/NotⅠ酶切 | 第41页 |
| ·pCANTAB 5E- scFv 重组质粒的构建 | 第41页 |
| ·重组噬菌体的制备 | 第41-42页 |
| ·噬菌体滴度测定 | 第42页 |
| ·单链抗体噬菌体抗体库的富集淘选 | 第42-43页 |
| ·用ELISA 方法检测TTX 特异性的单链抗体 | 第43页 |
| ·scFv 序列比对分析 | 第43页 |
| ·scFv 单链抗体可溶性表达 | 第43-45页 |
| 结果与分析 | 第45-53页 |
| 1. 脾脏总RNA 提取及cDNA 合成 | 第45页 |
| 2. VH 和VL 基因扩增 | 第45-46页 |
| 3. scFv 基因片段组装与扩增 | 第46-47页 |
| 4. 抗TTX-KLH 噬菌体抗体库载体的构建 | 第47页 |
| 5. 噬菌体抗体库的构建 | 第47-48页 |
| 6. scFv 的噬菌体表面展示与淘选 | 第48-49页 |
| 7. scFv 的特异性鉴定 | 第49页 |
| 8. scFv 的PCR 和酶切验证 | 第49-51页 |
| 9. scFv 测序 | 第51页 |
| 10. scFv 的可溶性表达与ELISA 检测 | 第51-53页 |
| 讨论 | 第53页 |
| 1 总RNA 提取 | 第53页 |
| 2 VH 和VL 的扩增 | 第53页 |
| 3 scFv 的组装与扩增 | 第53页 |
| 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |