| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·睾丸酮丛毛单胞菌的研究概况 | 第12-14页 |
| ·类固醇化合物 | 第12页 |
| ·羟类固醇脱氢酶（HSDs）的特性 | 第12-13页 |
| ·睾丸酮丛毛单胞菌关键酶3a-HSD/CR 表达调控 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的研究概况 | 第14-18页 |
| ·微生物群体感应 | 第15-17页 |
| ·aiiA 研究现状 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义及主要研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·酶、生化试剂及试剂盒 | 第20页 |
| ·ELISA 相关材料 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-30页 |
| ·细菌培养 | 第21页 |
| ·质粒DNA 小量提取 | 第21-22页 |
| ·表达载体pET29a-3α-HSD/CR 和pET29a-aiiA 的构建 | 第22-26页 |
| ·表达载体pET29a-3α-HSD/CR-aiiA 的构建 | 第26页 |
| ·重组子目的蛋白的诱导表达 | 第26-29页 |
| ·真核表达载体pCMBIA1301-3α-HSD/CR-aiiA 的构建 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-46页 |
| ·PCR 扩增和重组质粒鉴定 | 第30-35页 |
| ·3α-HSD/CR 基因和aiiA 基因的PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·pET29a-3α-HSD/CR 表达载体的PCR 及酶切鉴定 | 第31-33页 |
| ·pET29a-3-HSD/CR-aiiA 原核表达载体的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组子目的蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·工程菌的生长曲线 | 第35-36页 |
| ·ELISA 检测融合蛋白的表达量 | 第36-39页 |
| ·IPTG 浓度对3α-HSD/CR-aiiA 蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| ·温度对目的表达蛋白的影响 | 第37-39页 |
| ·优化条件后目的表达蛋白的情况 | 第39页 |
| ·表达载体pET29a-3-HSD/CR 和pET29a-aiiA 的SDS-PAGE | 第39-40页 |
| ·表达载体pET29a-3-HSD/CR-aiiA 的SDS-PAGE | 第40-41页 |
| ·3α-HSD/CR-aiiA 蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·3α-HSD/CR-aiiA 融合蛋白对睾丸酮的降解能力 | 第42-43页 |
| ·3α-HSD/CR -aiiA 融合蛋白的抗病性测定 | 第43页 |
| ·真核表达载体pCMBIA1301-3-HSD/CR-aiiA 的构建 | 第43-46页 |
| 4 讨论与结论 | 第46-49页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·3α-HSD/CR 和aiiA 基因 | 第46页 |
| ·表达载体的选择 | 第46-47页 |
| ·诱导条件的优化 | 第47页 |
| ·双基因在大肠杆菌中的共表达 | 第47-48页 |
| ·双基因融合蛋白的活性 | 第48页 |
| ·结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录Ⅰ试验所用部分试剂配方 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
