| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| 1.1 嗜麦芽窄食单胞菌研究现状 | 第13-14页 |
| 1.1.1 生物学性状和分布 | 第13页 |
| 1.1.2 临床研究 | 第13-14页 |
| 1.2 biofilm研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 biofilm的成分 | 第14页 |
| 1.2.2 biofilm的形成 | 第14-15页 |
| 1.2.3 biofilm与耐药性 | 第15页 |
| 1.3 第二信使c-di-GMP信号通路研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 c-di-GMP的代谢 | 第15-16页 |
| 1.3.2 c-di-GMP的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.3.3 c-di-GMP调控致病因子 | 第17页 |
| 1.4 研究目的及技术路线 | 第17-19页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第17-18页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 总DNA的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 质粒的制备 | 第20页 |
| 2.2.3 Sma CGMCC1.1788感受态细胞的制备和电击转化 | 第20-21页 |
| 2.2.4 大肠杆菌DH5α热击超级感受态细胞的制备和热击转化 | 第21页 |
| 2.2.5 读码框内删除(In-frame deletion)突变体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.6 生物被膜(biofilm)定量检测 | 第22页 |
| 2.2.7 游动性检测 | 第22页 |
| 2.2.8 半定量RT-PCR和 q RT-PCR | 第22-24页 |
| 2.2.9 蛋白质的表达和纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.10 蛋白质磷酸化检测 | 第25页 |
| 2.2.11 凝胶阻滞实验(EMSA) | 第25-26页 |
| 2.2.12 c-di-GMP代谢检测 | 第26页 |
| 2.2.13 c-di-GMP定量检测 | 第26-27页 |
| 第三章 实验结果 | 第27-50页 |
| 3.1 Sma K279a基因组编码27个与c-di-GMP代谢相关的蛋白 | 第27-28页 |
| 3.2 bsmR参与调控细菌游动性和biofilm形成 | 第28-31页 |
| 3.2.1 pK18mobSacB框内删除突变体的构建 | 第28页 |
| 3.2.2 bsmR互补菌株的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.3 bsmR对 biofilm形成的调控 | 第29-30页 |
| 3.2.4 bsmR对细菌游动性的调控 | 第30页 |
| 3.2.5 WT、ΔbsmR、ΔbsmR-OXbsmR菌株的生长表型检测 | 第30-31页 |
| 3.3 bsmR对细菌游动性和biofilm形成的调控与其磷酸化水平无关 | 第31-33页 |
| 3.3.1 重组菌株OXbsmRD54A和OXbsmRD54E的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.2 磷酸化水平对biofilm形成的影响 | 第32页 |
| 3.3.3 磷酸化水平对游动性的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.4 五个菌株的生长表型检测 | 第33页 |
| 3.4 DP16_RS18255-DP16_RS18250-bsmR-DP16_RS18240位于同一个操纵子中 | 第33-36页 |
| 3.4.1 RT-PCR解析bsmR的操纵子结构 | 第33-34页 |
| 3.4.2 操纵子编码的4个蛋白的二级结构预测 | 第34-35页 |
| 3.4.3 BsmT-DP16_RS18250-BsmR-DP16_RS18240蛋白的表达纯化 | 第35页 |
| 3.4.4 DP16_RS18250和DP16_RS18240 蛋白的自激酶活性检测 | 第35-36页 |
| 3.5 bsmR调控细菌biofilm和游动性的生化机制 | 第36-39页 |
| 3.5.1 BsmR能够在体外降解c-di-GMP | 第36页 |
| 3.5.2 过表达BsmR显著降低细菌细胞内c-di-GMP的水平 | 第36-38页 |
| 3.5.3 BsmR的 PDE活性参与BsmR对游动性和biofilm形成的调控 | 第38-39页 |
| 3.6 bsmR调控细菌biofilm的形成和游动性的分子机理解析 | 第39-41页 |
| 3.6.1 RNA-seq表明bsmR影响349 个下游基因的表达 | 第39-40页 |
| 3.6.2 fsnR是 bsmR调控的靶标基因之一 | 第40-41页 |
| 3.7 bsmT参与调控Sma biofilm的形成和细菌游动性 | 第41-44页 |
| 3.7.1 bsmT、DP16_RS18250和DP16_RS18240 遗传分析菌株的构建 | 第41-42页 |
| 3.7.2 biofilm形成检测 | 第42-43页 |
| 3.7.3 游动性检测 | 第43-44页 |
| 3.7.4 生长表型检测 | 第44页 |
| 3.8 bsmT和bsmR的调控关系分析 | 第44-47页 |
| 3.8.1 bsmT和bsmR双突变体及互补菌株的构建 | 第44-45页 |
| 3.8.2 biofilm形成检测 | 第45-46页 |
| 3.8.3 游动性检测 | 第46页 |
| 3.8.4 生长表型检测 | 第46-47页 |
| 3.9 bsmT通过正反馈途径调控自身操纵子的表达 | 第47-48页 |
| 3.9.1 bsmT正调控bsmT、bsmR、DP16_RS18250、DP16_RS18240 基因的表达 | 第47-48页 |
| 3.9.2 EMSA实验证明BsmT直接结合自身所在操纵子的启动子区 | 第48页 |
| 3.10 小结 | 第48-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附表 | 第56-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
| 研究生阶段学术成果 | 第70-72页 |
