| 缩略词 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 沙门菌的概述 | 第12页 |
| 1.2 沙门菌抗原结构 | 第12-13页 |
| 1.3 沙门菌的毒力因子 | 第13-15页 |
| 1.4 OmpD/NmpC蛋白概述 | 第15-16页 |
| 1.5 沙门菌的OmpD/NmpC蛋白 | 第16-17页 |
| 1.6 λ-Red重组技术概述 | 第17-18页 |
| 1.7 研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 肠炎沙门菌NmpC蛋白原核表达及免疫保护力研究 | 第19-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 试验菌株、质粒及动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 pET-28a-nmpC表达载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.3 His-NmpC(rNmpC)蛋白的原核表达及验证 | 第21-22页 |
| 2.2.4 rNmpC蛋白的可溶性分析及纯化 | 第22页 |
| 2.2.5 多抗血清制备及识别rNmpC蛋白效果验证 | 第22页 |
| 2.2.6 免疫小鼠血清抗体水平的检测 | 第22-23页 |
| 2.2.7 rNmpC蛋白免疫保护试验 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-28页 |
| 2.3.1 nmpC基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.3.2 构建原核表达载体pET-28a-nmpC | 第24页 |
| 2.3.3 rNmpC蛋白的原核表达及验证 | 第24-25页 |
| 2.3.4 rNmpC蛋白的表达形式鉴定及纯化 | 第25-26页 |
| 2.3.5 鼠源多抗血清对rNmpC蛋白识别效果验证 | 第26-27页 |
| 2.3.6 rNmpC蛋白免疫保护力试验 | 第27页 |
| 2.3.7 蛋白免疫小鼠血清抗体水平的检测结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论与分析 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 第三章 肠炎沙门菌nmpC基因缺失株的构建 | 第29-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 试验菌株及质粒 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂与酶 | 第29页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 试验菌株及质粒的制备 | 第30页 |
| 3.2.2 λ-Red同源重组引物设计 | 第30页 |
| 3.2.3 扩增同源重组片段 | 第30-31页 |
| 3.2.4 肠炎沙门菌C50336感受态细胞的制备及pKD46转化 | 第31页 |
| 3.2.5 C50336/pKD46感受态的制备及电转化 | 第31-32页 |
| 3.2.6 pCP20质粒的介导抗性基因的敲除 | 第32页 |
| 3.3 回补株的构建 | 第32页 |
| 3.3.1 回补菌株表达载体pBR322-nmpC的构建 | 第32页 |
| 3.3.2 重组载体pBR322-nmpC的转化 | 第32页 |
| 3.4 检测基因缺失及回补效果 | 第32-33页 |
| 3.5 结果与分析 | 第33-34页 |
| 3.5.1 菌株的检测结果 | 第33页 |
| 3.5.2 缺失株及回补株的构建 | 第33-34页 |
| 3.5.3 用Western blot方法检测基因缺失及回补效果 | 第34页 |
| 3.6 讨论与分析 | 第34-35页 |
| 3.7 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 肠炎沙门菌C50336ΔnmpC基因缺失株的生物学特性及毒力研究 | 第36-56页 |
| 4.1 试验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第36页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 .主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 4.1.4 常用试剂的配制 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 4.2.1 C50336ΔnmpC对生长速率的影响 | 第37页 |
| 4.2.2 C50336ΔnmpC对生化特性的影响 | 第37页 |
| 4.2.3 C50336ΔnmpC对运动能力的影响 | 第37页 |
| 4.2.4 C50336ΔnmpC对生物被膜的影响 | 第37-38页 |
| 4.2.5 RT-PCR检测nmpC基因缺失对肠炎沙门菌毒力因子的影响 | 第38-40页 |
| 4.2.6 C50336ΔnmpC对环境应激抵抗力的测定 | 第40-41页 |
| 4.2.7 C50336ΔnmpC对毒力的影响 | 第41页 |
| 4.2.9 西药药敏试验 | 第41页 |
| 4.2.10 中药抑菌试验 | 第41-42页 |
| 4.2.11 检测肠炎沙门菌C50336ΔnmpC基因缺失弱毒苗的保护率 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-53页 |
| 4.3.1 C50336ΔnmpC对生长速率的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.2 C50336ΔnmpC对生化特性的影响 | 第43-45页 |
| 4.3.3 C50336ΔnmpC对运动能力的影响 | 第45页 |
| 4.3.4 C50336ΔnmpC对生物被膜的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.5 C50336ΔnmpC对生物被膜成分的结果 | 第46-47页 |
| 4.3.6 C50336ΔnmpC对毒力因子的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.7 C50336ΔnmpC抵抗环境应激能力的结果 | 第48页 |
| 4.3.8 C50336ΔnmpC对毒力的影响 | 第48-51页 |
| 4.3.9 C50336ΔnmpC对耐药性的结果 | 第51-52页 |
| 4.3.10 C50336ΔnmpC对中草药体外抑菌的结果 | 第52页 |
| 4.3.11 减毒苗的保护试验结果 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第53-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
