| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 文中主要英文缩略词一览表 | 第6-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-35页 |
| 1.1 干细胞综述 | 第9-22页 |
| 1.1.1 干细胞的定义及分类 | 第9页 |
| 1.1.2 胚胎干细胞的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.3 诱导多能性干细胞的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.4 干细胞调控网络概述 | 第14-18页 |
| 1.1.5 体细胞重编程为iPS细胞的机制 | 第18-20页 |
| 1.1.6 表观遗传修饰对多能性的影响 | 第20-22页 |
| 1.2 核移植技术的研究进展 | 第22-29页 |
| 1.2.1 核移植的定义及起源 | 第22页 |
| 1.2.2 各个物种中核移植技术的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.2.3 手工克隆简介 | 第24-25页 |
| 1.2.4 克隆技术中存在的问题 | 第25页 |
| 1.2.5 体细胞核移植与iPS细胞诱导两种重编程方法的对比 | 第25-27页 |
| 1.2.6 核移植胚胎来源的ES细胞的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.2.7 嵌合动物制作方法概述 | 第28-29页 |
| 1.3 OCT4-GFP报告系统的应用 | 第29-31页 |
| 1.4 piggyBac转座子概述 | 第31-32页 |
| 1.5 猪的研究价值 | 第32-33页 |
| 1.5.1 猪作为人类疾病模型的价值 | 第32-33页 |
| 1.5.2 猪作为人类器官移植供体的价值 | 第33页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-56页 |
| 2.1 实验所用细胞系及动物来源 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.2.1 主要实验仪器和试剂耗材 | 第35-37页 |
| 2.2.2 主要试剂及培养基的配制 | 第37-40页 |
| 2.3 实验方法 | 第40-56页 |
| 2.3.1 质粒、基因组DNA及RNA提取相关 | 第40-42页 |
| 2.3.2 细胞培养相关 | 第42-43页 |
| 2.3.3 猪iPS细胞诱导相关 | 第43-45页 |
| 2.3.4 猪iPS细胞检测相关 | 第45-49页 |
| 2.3.5 构建猪克隆胚胎相关 | 第49-51页 |
| 2.3.6 胚胎相关的其他操作方法 | 第51-56页 |
| 第三章 猪iPS细胞部分的实验结果 | 第56-82页 |
| 3.1 猪iPS细胞的诱导建系及多能性鉴定 | 第56-60页 |
| 3.2 猪iPS细胞嵌合能力的检测 | 第60-67页 |
| 3.2.1 利用胚胎注射法构建嵌合体 | 第60-62页 |
| 3.2.2 利用胚胎聚合法构建嵌合体 | 第62-64页 |
| 3.2.3 定量PCR检测猪iPS细胞中内外源多能性基因的表达量 | 第64-67页 |
| 3.3 OCT4-EGFP报告系统在猪体细胞重编程中的应用 | 第67-82页 |
| 3.3.1 OCT4-EGFP报告质粒的构建 | 第67-68页 |
| 3.3.2 OCT4-EGFP转基因阳性细胞系的获得 | 第68-69页 |
| 3.3.3 OCT4-EGFP质粒在猪早期胚胎中的表达 | 第69-82页 |
| 第四章 猪ES细胞建系部分的实验结果 | 第82-91页 |
| 4.1 用猪孤雌激活胚胎建ES细胞系的结果 | 第82-85页 |
| 4.1.1 免疫外科手术法分离猪囊胚的内细胞团 | 第82-83页 |
| 4.1.2 不同培养条件下建系的结果 | 第83-84页 |
| 4.1.3 TSA对猪孤雌激活胚胎发育的影响 | 第84-85页 |
| 4.2 用猪核移植胚胎分离培养ES细胞的结果 | 第85-88页 |
| 4.2.1 用OCT4-EGFP克隆胚胎分离培养猪ntESCs的结果 | 第85-87页 |
| 4.2.2 用SOX2-tdTomato克隆胚胎分离猪ntESCs的结果 | 第87-88页 |
| 4.3 用猪体外受精胚胎的建系结果 | 第88-89页 |
| 4.4 猪体内胚胎的获得与ES细胞建系 | 第89-91页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第91-96页 |
| 5.1 猪iPS细胞不能形成嵌合体的原因 | 第91-92页 |
| 5.2 OCT4-EGFP报告系统的选择 | 第92页 |
| 5.3 TSA对OCT4-EGFP在克隆胚胎中表达的影响 | 第92-93页 |
| 5.4 基于CRISPR/Cas的筛选系统在猪iPS细胞诱导过程中的应用 | 第93-94页 |
| 5.5 大动物ES细胞建系难 | 第94-96页 |
| 第六章 结论 | 第96-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 个人简历 | 第117页 |
