| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 WRKY转录因子 | 第14-17页 |
| 1.1.1 WRKY转录因子家族和分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 WRKY转录因子进化分析 | 第15-17页 |
| 1.2 WRKY转录因子的生物学功能 | 第17-22页 |
| 1.2.1 WRKY转录因子与非生物胁迫 | 第18-19页 |
| 1.2.2 WRKY转录因子与生物胁迫 | 第19-20页 |
| 1.2.3 WRKY转录因子与次生物代谢 | 第20页 |
| 1.2.4 WRKY转录因子与组织发育 | 第20-21页 |
| 1.2.5 WRKY转录因子与叶片衰老 | 第21-22页 |
| 1.3 WRKY转录因子在棉花中的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第24-26页 |
| 第二章 GhWRKY27 基因的功能分析 | 第26-60页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-45页 |
| 2.1.1 棉花的种植与取样 | 第26页 |
| 2.1.2 基因组DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.1.3 总RNA提取与质量检测 | 第27-28页 |
| 2.1.4 cDNA合成和荧光定量PCR | 第28-30页 |
| 2.1.5 过表达GhWRKY27 的转基因拟南芥种植与衰老表型观察 | 第30页 |
| 2.1.6 叶绿素含量提取 | 第30-31页 |
| 2.1.7 GhWRKY27 启动子的克隆和序列分析 | 第31-33页 |
| 2.1.8 GhWRKY27 自激活载体构建与自激活检测 | 第33-35页 |
| 2.1.9 酵母双杂交文库筛选及互作验证 | 第35-37页 |
| 2.1.10 双分子荧光互补(BiFC) | 第37-39页 |
| 2.1.11 Y1H试验 | 第39-41页 |
| 2.1.12 EMSA试验 | 第41-42页 |
| 2.1.13 双荧光素酶试验 | 第42-45页 |
| 2.2 结果与分析 | 第45-58页 |
| 2.2.1 过表达转基因拟南芥促进衰老 | 第45-46页 |
| 2.2.2 启动子序列分析 | 第46-47页 |
| 2.2.3 自激活检测 | 第47-48页 |
| 2.2.4 酵母双杂交文库筛选 | 第48-51页 |
| 2.2.5 GhWRKY27与GhTT2 相互作用 | 第51-52页 |
| 2.2.6 GhWRKY27 结合GhCYP94C1和GhRipen2-2 启动子 | 第52-55页 |
| 2.2.7 GhTT2 抑制GhWRKY27 对下游靶基因的激活表达 | 第55-56页 |
| 2.2.8 GhTT2、GhCYP94C1和GhRipen2-2 叶片衰老表达模式 | 第56-57页 |
| 2.2.9 GhCYP94C1 不同组织和花芽发育表达模式 | 第57-58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-60页 |
| 第三章 GhWRKY42 基因的克隆和功能分析 | 第60-80页 |
| 3.1 材料与方法 | 第60-67页 |
| 3.1.1 植物材料与取样 | 第60页 |
| 3.1.2 基因组DNA提取 | 第60页 |
| 3.1.3 总RNA提取与质量检测 | 第60-61页 |
| 3.1.4 cDNA合成和荧光定量PCR | 第61页 |
| 3.1.5 GhWRKY42 基因和启动子缺失片段的克隆 | 第61页 |
| 3.1.6 过表达载体构建和农杆菌转化 | 第61-62页 |
| 3.1.7 拟南芥的遗传转化 | 第62-63页 |
| 3.1.8 过表达GhWRKY42 转基因拟南芥衰老表型 | 第63页 |
| 3.1.9 ProGhWRKY42::GUS转基因拟南芥组织表达和的胁迫处理 | 第63-64页 |
| 3.1.10 启动子在烟草中的瞬时表达 | 第64页 |
| 3.1.11 组织化学GUS染色 | 第64-65页 |
| 3.1.12 GhWRKY42 自激活载体构建与自激活检测 | 第65页 |
| 3.1.13 VIGS试验 | 第65-67页 |
| 3.2 结果与分析 | 第67-77页 |
| 3.2.1 基因克隆与序列分析 | 第67-68页 |
| 3.2.2 组织、叶片衰老与胁迫处理表达模式 | 第68-71页 |
| 3.2.3 转录激活活性试验 | 第71页 |
| 3.2.4 启动子序列分析 | 第71-73页 |
| 3.2.5 ProGhWRKY42::GUS转基因拟南芥GUS活性 | 第73-74页 |
| 3.2.6 启动子缺失试验 | 第74-75页 |
| 3.2.7 过表达GhWRKY42 转基因拟南芥促进衰老 | 第75-76页 |
| 3.2.8 VIGS植株株高降低 | 第76-77页 |
| 3.3 讨论 | 第77-80页 |
| 第四章 GhWRKY91 基因的克隆和功能分析 | 第80-105页 |
| 4.1 材料与方法 | 第80-87页 |
| 4.1.1 植物材料和生长条件 | 第80页 |
| 4.1.2 基因组DNA提取 | 第80页 |
| 4.1.3 总RNA提取与质量检测 | 第80页 |
| 4.1.4 cDNA合成和荧光定量PCR | 第80-81页 |
| 4.1.5 GhWRKY91 基因和启动子的克隆 | 第81页 |
| 4.1.6 表达载体构建和农杆菌转化 | 第81-82页 |
| 4.1.7 过表达GhWRKY91 转基因拟南芥获得和表型观察 | 第82-83页 |
| 4.1.8 ProGhWRKY91::GUS拟南芥遗传转化和表型观察 | 第83页 |
| 4.1.9 组织化学GUS染色 | 第83页 |
| 4.1.10 GhWRKY91 自激活载体构建与自激活检测 | 第83页 |
| 4.1.11 VIGS试验 | 第83-84页 |
| 4.1.12 Y1H试验 | 第84-85页 |
| 4.1.13 EMSA试验 | 第85-86页 |
| 4.1.14 双荧光素酶试验 | 第86-87页 |
| 4.2 结果与分析 | 第87-102页 |
| 4.2.1 基因序列与进化分析 | 第87-88页 |
| 4.2.2 启动子上游调控元件分析 | 第88-90页 |
| 4.2.3 转录激活活性试验 | 第90-91页 |
| 4.2.4 组织、叶片衰老和胁迫处理表达模式 | 第91-92页 |
| 4.2.5 ProGhWRKY91::GUS转基因拟南芥GUS活性 | 第92-94页 |
| 4.2.6 过表达GhWRKY91 转基因拟南芥植株变小 | 第94页 |
| 4.2.7 过表达GhWRKY91 转基因拟南芥延缓叶片衰老 | 第94-95页 |
| 4.2.8 过表达GhWRKY91 转基因拟南芥对干旱不敏感 | 第95-97页 |
| 4.2.9 VIGS棉花降低了抗旱性 | 第97页 |
| 4.2.10 Y1H验证GhWRKY91 对下游靶基因的作用 | 第97-98页 |
| 4.2.11 pGEX-4T-1-GhWRKY91 原核蛋白表达 | 第98-99页 |
| 4.2.12 EMSA验证GhWRKY91 蛋白对下游靶基因的作用 | 第99-100页 |
| 4.2.13 GhWRKY91 激活GhWRKY17 的表达 | 第100-101页 |
| 4.2.14 GhWRKY17 在叶片衰老表达模式 | 第101-102页 |
| 4.2.15 调控通路图 | 第102页 |
| 4.3 讨论 | 第102-105页 |
| 第五章 全文结论 | 第105-107页 |
| 5.1 全文结论 | 第105-106页 |
| 5.2 研究展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 作者简历 | 第125页 |
