| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 环糊精糖基转移酶 | 第11-12页 |
| 1.2 微生物来源的CGTase和异源表达 | 第12-14页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第14-17页 |
| 1.3.1 毕赤酵母的外源蛋白分泌机制 | 第14-15页 |
| 1.3.2 提高毕赤酵母分泌表达外源蛋白的策略 | 第15-17页 |
| 1.4 CGTase的稳定性 | 第17页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第17-18页 |
| 1.6 本课题的研究思路和研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 毕赤酵母表达CGTase及初步发酵优化 | 第19-38页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 材料与仪器 | 第19-21页 |
| 2.2.2 菌体保藏与培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.3 cgt的密码子优化 | 第22页 |
| 2.2.4 引物的设计 | 第22页 |
| 2.2.5 质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.6 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 2.2.7 毕赤酵母电转化方法 | 第23页 |
| 2.2.8 电转化以及高拷贝转化子的筛选 | 第23-24页 |
| 2.2.9 重组CGTase表达菌株的初步诱导表达 | 第24页 |
| 2.2.10 β-CGTase的测定 | 第24页 |
| 2.2.11 γ-CGTase的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.2.13 毕赤酵母密码子优化 | 第25页 |
| 2.2.14 重组CGTase生长曲线的测定 | 第25页 |
| 2.2.15 诱导初始pH对重组CGTase环化活力的影响 | 第25页 |
| 2.2.16 接种量对重组CGTase环化活力的影响 | 第25页 |
| 2.2.17 诱导温度对重组CGTase环化活力的影响 | 第25-26页 |
| 2.2.18 甲醇添加量对重组CGTase环化活力的影响 | 第26页 |
| 2.2.19 重组CGTase的初步制备 | 第26页 |
| 2.2.20 透析处理 | 第26页 |
| 2.2.21 蛋白质含量的测定 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-37页 |
| 2.3.1 质粒的酶切验证 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组CGTase表达菌株的初步筛选 | 第27-30页 |
| 2.3.3 重组CGTase转化子的第二次筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.4 最佳接种龄的确定 | 第31页 |
| 2.3.5 优化诱导pH | 第31-33页 |
| 2.3.6 优化诱导温度 | 第33-34页 |
| 2.3.7 优化接种量 | 第34-35页 |
| 2.3.8 优化甲醇添加量 | 第35-36页 |
| 2.3.9 重组CGTase的初步制备 | 第36-37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 重组CGTase的性质分析 | 第38-47页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 材料与仪器 | 第38页 |
| 3.2.2 糖基化分析 | 第38页 |
| 3.2.3 重组CGTase的最适反应温度 | 第38页 |
| 3.2.4 重组CGTase的最适pH | 第38页 |
| 3.2.5 重组CGTase的温度稳定性 | 第38-39页 |
| 3.2.6 重组CGTase的pH稳定性 | 第39页 |
| 3.2.7 重组CGTase的最适底物浓度、K_m值 | 第39页 |
| 3.2.8 Endo-H和PNGaseF对重组酶的糖基化分析 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 3.3.1 重组CGTase的最适反应温度 | 第39-40页 |
| 3.3.2 重组CGTase的最适pH | 第40-41页 |
| 3.3.3 重组CGTase的温度稳定性 | 第41页 |
| 3.3.4 重组CGTase的pH稳定性 | 第41-42页 |
| 3.3.5 重组CGTase的最适底物浓度、K_m值 | 第42-43页 |
| 3.3.6 糖基化分析 | 第43-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第四章 重组CGTase稳定性以及催化产物研究 | 第47-58页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 材料与仪器 | 第47-48页 |
| 4.2.2 重组CGTase稳定剂的筛选及浓度优化 | 第48页 |
| 4.2.3 重组CGTase添加复合稳定剂的配比优化 | 第48页 |
| 4.2.4 复合稳定剂对重组CGTase性质的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.5 复合稳定剂对重组CGTase性质的贮存稳定性影响 | 第49页 |
| 4.2.6 重组CGTase的热力学研究 | 第49页 |
| 4.2.7 重组CGTase转化马铃薯淀粉产环糊精的转化情况测定 | 第49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-57页 |
| 4.3.1 醇类稳定剂的筛选及浓度优化 | 第49-50页 |
| 4.3.2 无机盐类稳定剂的筛选及浓度优化 | 第50-51页 |
| 4.3.3 大分子有机物稳定剂的筛选及浓度优化 | 第51-52页 |
| 4.3.4 重组CGTase添加复合稳定剂的配比优化 | 第52-53页 |
| 4.3.5 复合稳定剂对重组CGTase最适温度的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.6 复合稳定剂对重组CGTase温度稳定性的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.7 复合稳定剂对重组CGTase性质的贮存稳定性影响 | 第55页 |
| 4.3.8 重组CGTase的热力学研究 | 第55-56页 |
| 4.3.9 重组CGTase转化马铃薯淀粉 | 第56-57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 结论和展望 | 第58-60页 |
| 5.1 研究结论 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 在读期间公开发表的论文和承担科研项目及取得成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
