| 摘要 | 第7-11页 |
| ABSTRACT | 第11-16页 |
| 缩略符号说明(Abbreviation) | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 生物乙醇对经济与社会发展以及环境保护等的重要影响 | 第18页 |
| 1.2 生物乙醇作为燃料的发展历程和优缺点 | 第18-21页 |
| 1.3 酿酒酵母生产二代燃料乙醇的发展现状和有待解决的问题 | 第21-24页 |
| 1.4 实验室前期工作 | 第24-25页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容和意义 | 第25-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-42页 |
| 2.1 主要实验仪器与试剂 | 第28页 |
| 2.2 培养基 | 第28-29页 |
| 2.3 菌株与质粒 | 第29-31页 |
| 2.4 微生物学技术 | 第31-33页 |
| 2.4.1 菌株培养与菌株保藏 | 第31-32页 |
| 2.4.2 酿酒酵母菌株种子液的制备及其生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2.4.3 细胞干重的计算 | 第32-33页 |
| 2.4.4 点滴平板梯度生长实验 | 第33页 |
| 2.5 分子生物学方法 | 第33-37页 |
| 2.5.1 基因的合成和序列的测定 | 第33页 |
| 2.5.2 基因片段的扩增 | 第33-36页 |
| 2.5.3 常规分子生物学方法 | 第36页 |
| 2.5.4 酿酒酵母LiAc完整细胞转化法 | 第36页 |
| 2.5.5 G418抗性筛选标记(KanMX)的去除 | 第36-37页 |
| 2.6 酿酒酵母菌株对多种抑制因子耐受性的单因素检测 | 第37-38页 |
| 2.6.1 高温、高渗透压以及氧化性胁迫耐受性分析 | 第37页 |
| 2.6.2 乙酸、乙醇、糠醛、香草醛耐受性测定 | 第37-38页 |
| 2.7 胞外酶活和代谢产物检测 | 第38-39页 |
| 2.7.1 β-葡萄糖苷酶和β-木糖苷酶的活性测定 | 第38页 |
| 2.7.2 摇瓶限氧分批发酵 | 第38-39页 |
| 2.7.3 混菌限氧摇瓶发酵 | 第39页 |
| 2.7.4 中间代谢产物分析 | 第39页 |
| 2.8 薄层层析法分离低聚木糖 | 第39-40页 |
| 2.9 原生质体的制备与融合 | 第40-42页 |
| 2.9.1 原生质体的制备 | 第40-41页 |
| 2.9.2 原生质体形成率和再生率计算 | 第41页 |
| 2.9.3 原生质体的融合 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-70页 |
| 3.1 酿酒酵母菌株的抗性和耐受性分析 | 第42-49页 |
| 3.1.1 酿酒酵母菌株的来源 | 第43页 |
| 3.1.2 海藻糖含量的测定 | 第43-45页 |
| 3.1.3 谷胱甘肽含量的测定(以GSH/GSSG形式表示) | 第45页 |
| 3.1.4 酿酒酵母菌株对多种胁迫因子耐受性的单因素分析 | 第45-49页 |
| 3.2 异源木糖苷酶在木糖利用实验室菌株中的表达 | 第49-54页 |
| 3.2.1 外源木糖苷酶基因在实验室菌株BSPX042中的表达 | 第50-51页 |
| 3.2.2 重组酿酒酵母菌株木糖苷酶酶活测定和高效木糖苷酶的筛选 | 第51-54页 |
| 3.3 异源表达葡萄糖苷酶和木糖苷酶构建用于共培养发酵的酵母菌株 | 第54-59页 |
| 3.3.1 δ-sequence位点多拷贝整合β-葡萄糖苷酶基因BGL | 第55-57页 |
| 3.3.2 ADH2位点和δ-sequence位点整合表达β-木糖苷酶基因XYL | 第57-59页 |
| 3.4 菌株LF2和BLN04的共培养发酵(混菌发酵) | 第59-65页 |
| 3.4.1 菌株BLN26的胞外酶活测定和发酵性能 | 第60-61页 |
| 3.4.2 菌株LF2与菌株RBKXn2不同接种比例下共培养限氧发酵 | 第61-65页 |
| 3.5 构建表达木糖专一性转运蛋白的重组酿酒酵母菌株用于原生质体融合 | 第65-66页 |
| 3.6 菌株LF2和BLN26的原生质体制备再生与融合的初步探索 | 第66-70页 |
| 3.6.1 原生质体的制备和再生 | 第67-68页 |
| 3.6.2 原生质体的融合再生及融合子的筛选 | 第68-70页 |
| 全文总结和展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 附件 | 第84-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术成果 | 第86-87页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第87页 |
