| 中文摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-24页 |
| 1.1 油菜概述 | 第16页 |
| 1.2 油菜转基因研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 农杆菌介导转化法 | 第16页 |
| 1.2.2 基因枪法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 PFG介导法 | 第17页 |
| 1.2.4 电击法 | 第17页 |
| 1.2.5 显微注射法 | 第17页 |
| 1.2.6 激光微束穿刺法 | 第17页 |
| 1.2.7 RNA干扰技术 | 第17-18页 |
| 1.3 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术简介 | 第18页 |
| 1.4 植物中的己糖激酶 | 第18-22页 |
| 1.4.1 己糖激酶(Hexokinase,HXK)简介 | 第18-19页 |
| 1.4.2 己糖激酶的类型 | 第19-20页 |
| 1.4.3 己糖激酶对植物作用 | 第20-21页 |
| 1.4.4 己糖激酶调控植物体的光合作用 | 第21页 |
| 1.4.5 己糖激酶在植物体中的表达 | 第21-22页 |
| 1.5 本实验的研究目的意义和研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 本实验的研究目的意义 | 第22页 |
| 1.5.2 本实验的研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 利用花粉介导法获得油菜RNAi植株 | 第24-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.2 pCaMHXK9-RNAi质粒的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.3 质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第26页 |
| 2.2.4 pCaMHXK9-RNAi质粒的PCR检验 | 第26-27页 |
| 2.2.5 RNAi植株的获得 | 第27-29页 |
| 2.2.5.1 pCaMHXK9-RNAi质粒转入甘蓝型油菜 | 第27-28页 |
| 2.2.5.2 植物基因组DNA的提取(CTAB法) | 第28页 |
| 2.2.5.3 植物基因组PCR检验方法 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-32页 |
| 2.3.1 pCaMHXK9-RNAi质粒的PCR检验 | 第29页 |
| 2.3.2 花粉介导法获得拟RNAi植株 | 第29-30页 |
| 2.3.3 油菜植株的RNAi鉴定 | 第30-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 HXK9-RNAi抑制油菜的生长发育 | 第34-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第34页 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 观察RNAi植株在生长发育过程 | 第34-35页 |
| 3.2.1.1 RNAi植株的种子萌发 | 第35页 |
| 3.2.1.2 观察RNAi植株在生长发育成熟期的表型变化 | 第35页 |
| 3.2.2 RNAi植株叶表面分泌物鉴定 | 第35页 |
| 3.2.2.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第35页 |
| 3.2.2.2 叶表面分泌质的提取 | 第35页 |
| 3.2.2.3 硫酸-苯酚法测定植株叶表面的糖含量 | 第35页 |
| 3.2.3 油菜植株RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2.4 将提取的RNA反转录成cDNA | 第36-37页 |
| 3.2.5 测定HXK9基因的相对表达量 | 第37页 |
| 3.2.6 其他同源基因的相对表达量 | 第37-38页 |
| 3.2.7 脂代谢过程中GPAT6基因的相对表达量 | 第38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-46页 |
| 3.3.1 幼苗生长状况 | 第38-40页 |
| 3.3.2 RNAi植株在生长发育成熟期的表型变化 | 第40-45页 |
| 3.3.2.1 植株中HXK9基因的相对表达量 | 第42-43页 |
| 3.3.2.2 其他同源基因的相对表达量 | 第43-44页 |
| 3.3.2.3 脂代谢过程中GPAT6基因的相对表达量 | 第44-45页 |
| 3.3.3 植株叶表面糖含量测定 | 第45-46页 |
| 3.3.3.1 葡萄糖标准曲线 | 第45-46页 |
| 3.3.3.2 苯酚-硫酸法测定植株叶表面糖含量 | 第46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 HXK9-RNAi影响油菜的光合作用 | 第48-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第48页 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 研磨法提取植物叶片叶绿素 | 第48-49页 |
| 4.2.2 油菜植株RNA的提取 | 第49页 |
| 4.2.3 将提取的RNA反转录成cDNA | 第49页 |
| 4.2.4 叶绿素合成过程中POR基因相对表达量的测定 | 第49页 |
| 4.2.5 植株光和作用的测定 | 第49-50页 |
| 4.2.5.1 实验准备 | 第49-50页 |
| 4.2.5.2 实验操作步骤 | 第50页 |
| 4.2.6 叶绿素溶出实验 | 第50-51页 |
| 4.2.7 叶片的甲苯胺蓝染色 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-55页 |
| 4.3.1 RNAi植株中叶绿素含量升高 | 第51-52页 |
| 4.3.2 RNAi植株中POR基因的相对表达量升高 | 第52页 |
| 4.3.3 RNAi植株的光合作用提高 | 第52-53页 |
| 4.3.4 RNAi植株叶片的叶绿素溶出速度快 | 第53-54页 |
| 4.3.5 RNAi植株叶片的甲苯胺蓝染色面积较大 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-58页 |
| 总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 个人简历及联系方式 | 第73-76页 |
