| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 缩略语对照表 | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 .转氨酶的简介及分类 | 第11页 |
| 1.2 .转氨酶的应用及挑战 | 第11-17页 |
| 1.2.1 改变不利的热力学平衡 | 第12-16页 |
| 1.2.2 改变反应中的产物抑制—与另一个反应合成多个产物 | 第16-17页 |
| 1.2.3 酶修饰-定点突变 | 第17页 |
| 1.3 .其他新型转氨酶 | 第17-18页 |
| 1.4 .转氨反应的检测 | 第18-19页 |
| 1.4.1 紫外分光光度法(UV) | 第18-19页 |
| 1.4.2 高效液相色谱法(HPLC) | 第19页 |
| 1.5 .本课题的目的、意义及主要研究内容 | 第19-22页 |
| 第二章 转氨酶重组菌的构建及表达 | 第22-34页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 溶液配方 | 第22-23页 |
| 2.1.4 所需仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 LB培养基的配制 | 第24页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.3 AcOAT的目的基因的获得 | 第25页 |
| 2.2.4 表达载体pET30a-AcOAT的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.5 热击转化 | 第26页 |
| 2.2.6 AcOAT重组质粒的筛选及验证 | 第26-27页 |
| 2.2.7 ω-TAST和TATN重组工程菌的获得 | 第27页 |
| 2.2.8 重组菌的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.2.9 重组酶的亲和层析纯化 | 第28页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| 2.2.11 转氨酶浓度的检测 | 第29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-32页 |
| 2.3.1 双酶切验证结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE分析结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 转氨酶浓度测定结果 | 第31-32页 |
| 2.4 本章小结 | 第32-34页 |
| 第三章 转氨酶的酶学性质研究 | 第34-53页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 溶液配方 | 第34-35页 |
| 3.1.4 所需仪器 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-41页 |
| 3.2.1 转氨酶活性的测定 | 第35-37页 |
| 3.2.2 转氨酶最适pH的测定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 转氨酶最适温度的测定 | 第38-39页 |
| 3.2.4 转氨酶最适反应时间的测定 | 第39页 |
| 3.2.5 其他影响酶活性的因素 | 第39-40页 |
| 3.2.6 转氨酶Km值的测定 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-51页 |
| 3.3.1 转氨酶活性测定结果 | 第41-44页 |
| 3.3.2 转氨酶最适pH测定结果 | 第44-45页 |
| 3.3.3 转氨酶最适温度测定结果 | 第45-46页 |
| 3.3.4 转氨酶最适反应时间的测定结果 | 第46-48页 |
| 3.3.5 其他影响酶活性的因素 | 第48-50页 |
| 3.3.6 转氨酶Km值的测定 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第四章 转氨酶对于不同底物的活性测定 | 第53-62页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第53页 |
| 4.1.1 所需试剂配方 | 第53页 |
| 4.1.2 所需仪器 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 氨基供体活性测定 | 第53-55页 |
| 4.2.2 氨基受体活性测定 | 第55-57页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第57-60页 |
| 4.3.1 氨基供体活性测定结果 | 第57-59页 |
| 4.3.2 氨基受体活性测定结果 | 第59-60页 |
| 4.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第五章 嗜热集胞藻转氨酶TATA的进一步研究 | 第62-69页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第62页 |
| 5.1.1 菌株 | 第62页 |
| 5.1.2 试剂配方 | 第62页 |
| 5.1.3 所需仪器 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-66页 |
| 5.2.1 用分子伴侣和折叠酶共表达的方法解决表达中出现的包涵体 | 第62-64页 |
| 5.2.2 柱上复性 | 第64-66页 |
| 5.2.3 可溶性蛋白的活性测定 | 第66页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第66-68页 |
| 5.3.1 分子伴侣和折叠酶共表达 | 第66-67页 |
| 5.3.2 柱上复性结果 | 第67页 |
| 5.3.3 可溶性蛋白活性测定结果 | 第67-68页 |
| 5.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 全文总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
