| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 亲免蛋白的特征 | 第13-15页 |
| 1.1.1 亲免蛋白的性质及特点 | 第13页 |
| 1.1.2 亲免蛋白功能的多样性 | 第13-15页 |
| 1.2 拟南芥中的亲免蛋白的研究概况 | 第15-18页 |
| 1.2.1 拟南芥中亲免蛋白的特点 | 第15页 |
| 1.2.2 叶绿体基质中的亲免蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.3 类囊体腔中的亲免蛋白 | 第16-18页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术 | 第18-21页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9的工作机制 | 第18-19页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统的优点 | 第19-20页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9系统在拟南芥中的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 CYP26-2功能的初探 | 第23-33页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.3 药品及试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 蓝色活性胶分离类囊体膜 | 第24-27页 |
| 2.2.2 蔗糖密度梯度离心分离类囊体膜 | 第27-29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 2.3.1 BN-SDS-Western Blotting结果评估 | 第29-30页 |
| 2.3.2 蔗糖梯度离心-SDS检测结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 活性胶分析样品a、b和c | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 CYP26-2 T-DNA插入突变体的鉴定 | 第33-40页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 主要的仪器和试剂 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 T-DNA插入突变体基因型鉴定 | 第33-35页 |
| 3.2.2 T-DNA插入位点测序分析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 蛋白水平的鉴定 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 T-DNA插入突变体基因型鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.2 T-DNA插入位点测序分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 两种T-DNA插入突变体表型分析 | 第38-39页 |
| 3.4 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 CRISPR-Cas9系统获得CYP26-2的缺失突变体 | 第40-75页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第40-41页 |
| 4.1.3 酶和试剂盒 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-63页 |
| 4.2.1 载体的构建 | 第41-55页 |
| 4.2.1.1 PTG(polycistronic tRNA-gRNA,PTG)基因的获得 | 第41-49页 |
| 4.2.1.2 PTG基因及载体的酶切与纯化 | 第49-51页 |
| 4.2.1.3 目的PTG基因与pRGEB32的连接 | 第51-52页 |
| 4.2.1.4 转化 | 第52-53页 |
| 4.2.1.5 阳性克隆验证 | 第53-54页 |
| 4.2.1.6 重组质粒的提取 | 第54-55页 |
| 4.2.2 CYP26-2缺失突变体的筛选 | 第55-63页 |
| 4.2.2.1 转基因植株的获得 | 第55-57页 |
| 4.2.2.2 T1代Cas9切割植株筛选 | 第57-59页 |
| 4.2.2.3 纯合突变体的筛选 | 第59页 |
| 4.2.2.4 获得无Cas9的纯合突变体 | 第59页 |
| 4.2.2.5 突变体缺失片段测序分析 | 第59-60页 |
| 4.2.2.6 突变体特征的鉴定 | 第60-63页 |
| 4.3 结果与分析 | 第63-74页 |
| 4.3.1 载体的构建 | 第63-66页 |
| 4.3.1.1 五个目的小片段的扩增 | 第63-64页 |
| 4.3.1.2 PCR扩增PTG基因 | 第64-65页 |
| 4.3.1.3 阳性克隆菌落PCR验证 | 第65页 |
| 4.3.1.4 重组质粒测序分析 | 第65-66页 |
| 4.3.2 CYP26-2缺失突变体的筛选 | 第66-70页 |
| 4.3.2.1 转基因植株的获得 | 第66-67页 |
| 4.3.2.2 T1代转基因植株嵌合突变体的筛选分析 | 第67-68页 |
| 4.3.2.3 纯合突变体分析 | 第68-69页 |
| 4.3.2.4 Cas9-free纯合突变体的筛选结果 | 第69-70页 |
| 4.3.2.5 纯合无Cas9突变体测序分析 | 第70页 |
| 4.3.3 CYP26-2缺失突变体特征的鉴定 | 第70-72页 |
| 4.3.3.1 纯合突变体RNA水平分析 | 第70-71页 |
| 4.3.3.2 纯合突变体Western Blotting分析 | 第71-72页 |
| 4.3.3.3 CYP26-2缺失突变体表型分析 | 第72页 |
| 4.3.4 脱靶植株的鉴定 | 第72-74页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 一个糖敏感型突变体的基因定位与表型鉴定 | 第75-88页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第75页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第75页 |
| 5.1.2 仪器与工具 | 第75页 |
| 5.1.3 主要的工具网站 | 第75页 |
| 5.2 实验方法 | 第75-80页 |
| 5.2.1 建立遗传作图群体 | 第75页 |
| 5.2.2 BSA法分析突变位点 | 第75-79页 |
| 5.2.3 突变位点克隆进展 | 第79-80页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第80-87页 |
| 5.3.1 突变基因遗传分析 | 第80页 |
| 5.3.2 突变基因定位分析 | 第80-83页 |
| 5.3.3 突变位点克隆结果 | 第83-84页 |
| 5.3.4 突变体表型鉴定 | 第84-87页 |
| 5.4 小结 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第96-98页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
