| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第一章 实验材料 | 第9-11页 |
| 1.1 胆管癌细胞 | 第9页 |
| 1.2 重要仪器、设备 | 第9-10页 |
| 1.3 主要试剂及试剂盒 | 第10-11页 |
| 第二章 实验方法 | 第11-19页 |
| 2.1 细胞培养 | 第11-12页 |
| 2.1.1 胆管癌细胞RBE的复苏 | 第11页 |
| 2.1.2 RBE细胞的传代 | 第11页 |
| 2.1.3 细胞计数 | 第11-12页 |
| 2.1.4 RBE细胞的冻存 | 第12页 |
| 2.2 实验细胞的构建 | 第12-16页 |
| 2.2.1 细胞转染 | 第12-13页 |
| 2.2.1.1 细胞铺板 | 第12页 |
| 2.2.1.2 病毒转染 | 第12-13页 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR检测Wnt2b和β -catenin的干扰效果 | 第13-15页 |
| 2.2.2.1 样本总RNA的提取 | 第13-14页 |
| 2.2.2.2 逆转录反应 | 第14页 |
| 2.2.2.3 PCR反应 | 第14-15页 |
| 2.2.3 筛选实验细胞组 | 第15-16页 |
| 2.3 RT-PCR法检测RBE细胞中E-Cadherin、Vimentin、TGFβ 1、Smad4、Slug及Snail的表达 | 第16页 |
| 2.4 Western Blot法检测RBE细胞中E-Cadherin、Vimentin、TGFβ 1、Smad4、Slug及Snail的表达 | 第16-18页 |
| 2.4.1 提取细胞总蛋白 | 第16-17页 |
| 2.4.2 凝胶配制及加样 | 第17页 |
| 2.4.3 电泳 | 第17页 |
| 2.4.4 转膜 | 第17页 |
| 2.4.5 封闭 | 第17页 |
| 2.4.6 免疫杂交 | 第17-18页 |
| 2.4.7 显影与分析 | 第18页 |
| 2.5 统计学方法 | 第18-19页 |
| 第三章 实验结果 | 第19-23页 |
| 3.1 RT-PCR分别检测3种Wnt2b-siRNA和3种β -catenin-si RNA对RBE细胞Wnt2b和β -catenin表达的干扰效果 | 第19-20页 |
| 3.2 RT-PCR法检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、TGFβ 1、smad4、snail及slug的表达 | 第20-21页 |
| 3.3 Western Blot检测各组E-cadherin、Vimentin、TGFβ 1、smad4、snail及slug的表达 | 第21-23页 |
| 第四章 讨论 | 第23-27页 |
| 第五章 结论 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-30页 |
| 文献综述 | 第30-42页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-45页 |
