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柳枝稷分蘖突变体的创制和分蘖基因克隆及其功能验证

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
第一章 文献综述第15-25页
    1.1 柳枝稷的研究现状第15-18页
        1.1.1 柳枝稷的概述第15-17页
        1.1.2 柳枝稷在我国的发展潜力分析第17-18页
    1.2 植物分蘖性状的研究进展第18-21页
        1.2.1 禾本科植物分蘖生长的规律第18页
        1.2.2 影响分蘖的主要因素第18页
        1.2.3 植物激素在分蘖发育中的作用第18-19页
        1.2.4 环境因素对分蘖的影响第19页
        1.2.5 植物分蘖调控基因的研究现状第19-21页
    1.3 甲基磺酸乙酯(EMS)诱变在植物育种中的应用第21页
    1.4 RNA-seq技术在分子生物学中的应用第21-22页
    1.5 论文选题目的、技术路线及研究方案第22-25页
        1.5.1 目的意义第22-23页
        1.5.2 技术路线第23-24页
        1.5.3 研究方案第24-25页
第二章 柳枝稷不同品种(系)的抗逆性鉴定第25-46页
    2.1 材料与方法第25-26页
        2.1.1 试验材料第25页
        2.1.2 试验方法第25-26页
        2.1.3 测定项目与方法第26页
        2.1.4 数据处理第26页
    2.2 试验结果与分析第26-42页
        2.2.1 柳枝稷不同品种(系)的抗旱性鉴定第26-33页
            2.2.1.1 干旱对柳枝稷叶片相对含水量的影响第26-27页
            2.2.1.2 干旱对柳枝稷叶绿素含量的影响第27-28页
            2.2.1.3 干旱对柳枝稷分蘖期根冠比的影响第28-29页
            2.2.1.4 干旱对柳枝稷分蘖期MDA含量的影响第29-30页
            2.2.1.5 干旱对柳枝稷分蘖期保护酶活性的影响第30-32页
            2.2.1.6 复水后柳枝稷幼苗的生长变化第32-33页
        2.2.2 柳枝稷不同品种(系)的耐酸碱性鉴定第33-38页
            2.2.2.1 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗分蘖的影响第33页
            2.2.2.2 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗株高的影响第33-34页
            2.2.2.3 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗鲜重的影响第34-35页
            2.2.2.4 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗根冠比的影响第35页
            2.2.2.5 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗MDA含量的影响第35-36页
            2.2.2.6 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗根系活力的影响第36-37页
            2.2.2.7 酸碱胁迫对柳枝稷幼苗光合速率的影响第37-38页
        2.2.3 N、P、K对柳枝稷幼苗生长发育的影响第38-42页
            2.2.3.1 氮胁迫对柳枝稷苗期生长发育的影响第38-40页
            2.2.3.2 磷钾胁迫对柳枝稷苗期生长发育的影响第40-42页
    2.3 结论与讨论第42-46页
第三章 柳枝稷分蘖突变体的创制第46-55页
    3.1 材料与方法第46-47页
        3.1.1 实验材料第46页
        3.1.2 试验方法第46页
        3.1.3 测定指标第46页
        3.1.4 数据处理第46-47页
    3.2 结果与分析第47-52页
        3.2.1 柳枝稷种子EMS诱变体系的建立第47-49页
            3.2.1.1 EMS对柳枝稷种子发芽率的影响第47页
            3.2.1.2 EMS对柳枝稷种子成苗率的影响第47-48页
            3.2.1.3 EMS对柳枝稷MDA含量的影响第48页
            3.2.1.4 EMS对柳枝稷保护酶活性的影响第48-49页
        3.2.2 柳枝稷分蘖突变体表型性状的初步研究第49-52页
            3.2.2.1 突变体的分蘖性状第49-50页
            3.2.2.2 突变体的含氮量与粗蛋白含量第50-51页
            3.2.2.3 突变体的激素含量第51-52页
    3.3 结论与讨论第52-55页
第四章 利用RNA-seq技术对柳枝稷分蘖突变体进行研究第55-69页
    4.1 材料与方法第55-56页
        4.1.1 实验材料第55页
        4.1.2 实验方法第55页
        4.1.3 RNA-seq试验流程第55页
        4.1.4 RNA-seq信息分析流程第55-56页
    4.2 结果与分析第56-68页
        4.2.1 序列分析与组装第56-57页
        4.2.2 Unigenes分析第57页
        4.2.3 Unignes注释第57-59页
        4.2.4 Gene Ontology(GO)注释第59页
        4.2.5 基因的同源蛋白的(COG)聚类分析第59-61页
        4.2.6 基因的KEGG注释第61页
        4.2.7 差异基因的分析第61-63页
        4.2.8 植物激素途径中的功能基因第63-64页
        4.2.9 柳枝稷木质素合成中功能基因第64-66页
        4.2.10 柳枝稷分蘖调控基因的Real-time PCR分析第66-67页
        4.2.11 SSR和SNP开发第67-68页
    4.3 结论与讨论第68-69页
第五章 柳枝稷分蘖调控基因PvPIN1的克隆及其功能验证第69-85页
    5.1 材料与方法第69-73页
        5.1.1 试验材料第69页
        5.1.2 试验方法第69-73页
            5.1.2.1 Total RNA的提取(附表 3)第69页
            5.1.2.2 RT-PCR合成cDNA第一链第69-70页
            5.1.2.3 引物设计和片段的扩增第70页
            5.1.2.4 目的条带的回收第70页
            5.1.2.5 PCR回收产物的克隆第70页
            5.1.2.6 T载体的大肠杆菌DH5α 的转化第70页
            5.1.2.7 单菌落的挑选第70-71页
            5.1.2.8 干扰载体和表达载体的构建第71-72页
            5.1.2.9 转基因过程第72-73页
            5.1.2.10 基因组DNA的提取(附表 4)第73页
            5.1.2.11 Southern blot(附表 5)第73页
            5.1.2.12 Teal time(RT)-PCR检测基因表达量第73页
    5.2 结果与分析第73-83页
        5.2.1 PvPIN1基因的克隆第73-77页
            5.2.1.1 序列克隆第73页
            5.2.1.2 PIN1基因开放阅读框(ORF)序列分析第73-76页
            5.2.1.2 PvPIN1序列的结构域分析第76-77页
        5.2.2 PvPIN1基因的功能验证第77-83页
            5.2.2.1 转基因植株的PCR和Southern blot检测第77-79页
            5.2.2.2 转基因柳枝稷中PvPIN1基因在的表达量分析第79-80页
            5.2.2.3 柳枝稷转基因植株的生长素含量第80-81页
            5.2.2.4 PvPIN1基因对柳枝稷生长发育的影响第81-82页
            5.2.2.5 生长素极性运输抑制剂(TIBA)干扰生长素运输第82-83页
    5.3 结论与讨论第83-85页
第六章 柳枝稷分蘖调控基因PvTB1的克隆及其功能验证第85-95页
    6.1 实验材料与方法第85页
        6.1.1 试验材料同第五章第85页
        6.1.2 试验方法同第五章第85页
    6.2 结果与分析第85-93页
        6.2.1 PvTB1基因的克隆第85-88页
            6.2.1.1 柳枝稷TB1序列的克隆第85-86页
            6.2.1.2 柳枝稷TB1基因序列分析第86-88页
            6.2.1.3 PvTB1蛋白结果预测第88页
            6.2.1.4 PvTB1基因的进化树分析第88页
        6.2.2 PvTB1基因的功能验证第88-93页
            6.2.2.1 柳枝稷转PvTB1基因的鉴定第88-90页
            6.2.2.2 荧光定量PCR检测PvTB1基因的表达量第90-91页
            6.2.2.3 转基因植株的生长素和细胞分裂素含量第91-92页
            6.2.2.4 PvTB1基因的表达量与柳枝稷表型间的关系第92-93页
    6.3 结论与讨论第93-95页
第七章 柳枝稷基因枪转化法中采用国产裂解膜代替进.膜的可行性研究第95-100页
    7.1 材料与方法第95-96页
        7.1.1 试验材料第95页
        7.1.2 试验方法第95-96页
    7.2 结果与分析第96-98页
        7.2.1 国产与进.裂解膜的爆裂时压强的比较第96-97页
        7.2.2 国产与进.裂解膜对潮霉素抗性愈伤组织率的影响第97页
        7.2.3 国产与进.裂解膜对抗性愈伤植株分化的影响第97页
        7.2.4 转基因植株的PCR鉴定第97-98页
    7.3 结论与讨论第98-100页
第八章 结论与展望第100-102页
    8.1 主要结论第100-101页
    8.2 研究创新点第101页
    8.3 研究展望第101-102页
参考文献第102-113页
附录第113-120页
    附录1 柳枝稷水培培养基的配比第113-114页
    附表2 试验中所用的培养基第114-115页
    附表 3 Total RNA的提取第115-116页
    附表4 柳枝稷基因组DNA的提取方法第116-117页
    附表 5 Southern blot (上海生工提供)第117-120页
致谢第120-121页
作者简介第121-122页

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