| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-33页 |
| 1 胰岛素样生长化因子信号系统 | 第17-21页 |
| 1.1 IGF 配体 | 第17-19页 |
| 1.2 IGF 受体 | 第19-20页 |
| 1.3 IGF 结合蛋白 | 第20页 |
| 1.4 IGFs 信号系统对生长发育的作用 | 第20-21页 |
| 2 胰岛素样生长因子结合蛋白 | 第21-28页 |
| 2.1 六种 IGFBPs | 第21-23页 |
| 2.2 IGFBPs 的结构 | 第23-25页 |
| 2.3 IGFBPs 对 IGFs 的调控作用 | 第25-26页 |
| 2.4 IGFBPs 不依赖 IGFs 的作用 | 第26-28页 |
| 3 IGFBP 在鱼类中的研究 | 第28-31页 |
| 3.1 鱼类 IGFBPs 的发现 | 第28页 |
| 3.2 鱼类 IGFBPs 的克隆 | 第28-29页 |
| 3.3 鱼类 IGFBP 的表达和调控 | 第29-31页 |
| 4 本实验的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因的克隆和表达分析 | 第33-60页 |
| 1 材料和方法 | 第34-46页 |
| 1.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第34页 |
| 1.1.2 不同成体组织的取材 | 第34页 |
| 1.1.3 不同发育时期样品的取材 | 第34-35页 |
| 1.2 实验所用引物 | 第35页 |
| 1.3 总 RNA 的提取及纯化 | 第35-38页 |
| 1.3.1 总 RNA 的提取 | 第35-37页 |
| 1.3.2 总 RNA 的纯化 | 第37-38页 |
| 1.4 牙鲆 cDNA 第一条链的合成 | 第38-39页 |
| 1.5 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因核心片段的获得 | 第39-41页 |
| 1.5.1 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因核心片段的克隆 | 第39-40页 |
| 1.5.2 连接反应 | 第40页 |
| 1.5.3 转化与筛选 | 第40-41页 |
| 1.6 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第41-44页 |
| 1.6.1 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因 3’UTR 的获得 | 第41-43页 |
| 1.6.2 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因 5’UTR 的获得 | 第43页 |
| 1.6.3 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因 cDNA 序列的获得 | 第43-44页 |
| 1.7 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因序列分析 | 第44页 |
| 1.8 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因的组织分布和时序表达分析 | 第44-46页 |
| 1.8.1 模板 cDNA 的合成 | 第44-45页 |
| 1.8.2 实时荧光定量 PCR | 第45页 |
| 1.8.3 数据处理 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-56页 |
| 2.1 牙鲆总 RNA 的提取 | 第46页 |
| 2.2 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因核心序列的克隆 | 第46页 |
| 2.3 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因 cDNA 序列的获得和分析 | 第46-50页 |
| 2.4 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因的蛋白结构和聚类分析 | 第50-52页 |
| 2.4.1 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因的蛋白结构预测和分析 | 第50-52页 |
| 2.4.2 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因的系统进化分析 | 第52页 |
| 2.5 牙鲆 IGFBP-2a 和-2b 基因的组织分布和时序表达 | 第52-56页 |
| 2.5.1 牙鲆 IGFBP-2a 基因的组织分布和时序表达分析 | 第52-55页 |
| 2.5.2 牙鲆 IGFBP-2b 基因的组织分布和时序表达分析 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-60页 |
| 第三章 牙鲆 IGFBP-3 基因的克隆和表达分析 | 第60-77页 |
| 1 材料和方法 | 第61-65页 |
| 1.1 实验材料 | 第61页 |
| 1.2 实验所用引物 | 第61页 |
| 1.3 总 RNA 的提取及纯化 | 第61页 |
| 1.4 牙鲆 cDNA 第一条链的合成 | 第61页 |
| 1.5 牙鲆 IGFBP-3 基因核心片段的获得 | 第61-62页 |
| 1.6 牙鲆 IGFBP-3 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第62-63页 |
| 1.7 牙鲆 IGFBP-3 基因组序列的获得 | 第63-65页 |
| 1.7.1 牙鲆基因组 DNA 的提取 | 第63-64页 |
| 1.7.2 牙鲆 IGFBP-3 基因全长序列的获得 | 第64-65页 |
| 1.8 牙鲆 IGFBP-3 基因序列分析 | 第65页 |
| 1.9 牙鲆 IGFBP-3 基因的组织分布和时序表达分析 | 第65页 |
| 2 结果 | 第65-73页 |
| 2.1 牙鲆 IGFBP-3 基因 cDNA 序列的克隆和分析 | 第65-67页 |
| 2.2 牙鲆 IGFBP-3 基因序列克隆和分析 | 第67-68页 |
| 2.3 牙鲆 IGFBP-3 基因的蛋白结构和聚类分析 | 第68-72页 |
| 2.3.1 牙鲆 IGFBP-3 基因的蛋白结构预测和分析 | 第68-71页 |
| 2.3.2 牙鲆 IGFBP-3 基因的系统进化分析 | 第71-72页 |
| 2.4 牙鲆 IGFBP-3 基因的组织分布和时序表达 | 第72-73页 |
| 2.4.1 牙鲆 IGFBP-3 基因在成体组织中的表达 | 第72-73页 |
| 2.4.2 牙鲆 IGFBP-3 基因在不同发育时期的胚胎和仔鱼中的表达 | 第73页 |
| 讨论 | 第73-77页 |
| 第四章 牙鲆 IGFBP-4 基因的克隆、表达分析和原核表达 | 第77-105页 |
| 第一节 牙鲆 IGFBP-4 基因的克隆和表达分析 | 第78-91页 |
| 1 材料和方法 | 第78-81页 |
| 1.1 实验材料 | 第78页 |
| 1.2 实验所用引物 | 第78页 |
| 1.3 总 RNA 的提取及纯化 | 第78页 |
| 1.4 牙鲆 cDNA 第一条链的合成 | 第78页 |
| 1.5 牙鲆 IGFBP-4 基因核心片段的获得 | 第78-80页 |
| 1.6 牙鲆 IGFBP-4 基因全长 cDNA 序列的获得 | 第80页 |
| 1.7 牙鲆 IGFBP-4 基因组序列的获得 | 第80-81页 |
| 1.8 牙鲆 IGFBP-4 基因序列分析 | 第81页 |
| 1.9 牙鲆 IGFBP-4 基因的组织分布和时序表达分析 | 第81页 |
| 2 结果 | 第81-91页 |
| 2.1 牙鲆 IGFBP-4 基因 cDNA 序列的克隆和分析 | 第81-84页 |
| 2.2 牙鲆 IGFBP-4 基因序列克隆和分析 | 第84页 |
| 2.3 牙鲆 IGFBP-4 基因的蛋白结构和聚类分析 | 第84-87页 |
| 2.3.1 牙鲆 IGFBP-4 基因的蛋白结构预测和分析 | 第84-87页 |
| 2.3.2 牙鲆 IGFBP-4 基因的系统进化分析 | 第87页 |
| 2.4 牙鲆 IGFBP-4 基因的组织分布和时序表达 | 第87-91页 |
| 2.4.1 牙鲆 IGFBP-4 基因在成体组织中的表达 | 第87-89页 |
| 2.4.2 牙鲆 IGFBP-4 基因在不同发育时期的胚胎和仔鱼中的表达 | 第89-91页 |
| 第二节 牙鲆 IGFBP-4 的原核表达及产物纯化 | 第91-100页 |
| 1 材料和方法 | 第91-96页 |
| 1.1 实验材料和试剂 | 第91-92页 |
| 1.2 目的片段的扩增 | 第92页 |
| 1.3 重组质粒的构建 | 第92-94页 |
| 1.3.1 质粒提取 | 第92-93页 |
| 1.3.3 重组质粒的构建 | 第93-94页 |
| 1.4 重组菌株诱导条件的优化 | 第94-96页 |
| 1.4.1 重组菌株的活化和表达诱导 | 第94页 |
| 1.4.2 SDS-PAGE | 第94-95页 |
| 1.4.3 诱导时间和温度优化 | 第95-96页 |
| 1.5 重组蛋白的可溶性分析和纯化 | 第96页 |
| 2 结果 | 第96-100页 |
| 2.1 牙鲆 IGFBP-4 成熟肽片段的获得 | 第96页 |
| 2.2 重组质粒的构建 | 第96-98页 |
| 2.3 重组蛋白诱导时间和温度优化 | 第98页 |
| 2.3.1 重组蛋白诱导时间的优化 | 第98页 |
| 2.3.2 重组蛋白培养温度的优化 | 第98页 |
| 2.4 重组蛋白的可溶性分析和纯化 | 第98-100页 |
| 讨论 | 第100-105页 |
| 第五章 激素对牙鲆 IGFBP-3 和-4 基因的体外表达调控 | 第105-119页 |
| 1 材料和方法 | 第105-109页 |
| 1.1 实验材料 | 第105-106页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第105页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第105页 |
| 1.1.3 溶液配制 | 第105-106页 |
| 1.2 牙鲆肝细胞的分离 | 第106-107页 |
| 1.3 台盼蓝染色和细胞计数 | 第107-108页 |
| 1.3.1 台盼蓝染色 | 第107页 |
| 1.3.2 肝细胞计数 | 第107-108页 |
| 1.4 牙鲆肝细胞原代培养系统的建立 | 第108页 |
| 1.5 不同激素对牙鲆肝细胞的刺激 | 第108-109页 |
| 1.5.1 GH 对牙鲆 IGFBP-3 和 IGFBP-4 的剂量和时间效应 | 第108页 |
| 1.5.2 胰岛素对牙鲆 IGFBP-3 和 IGFBP-4 的剂量和时间效应 | 第108-109页 |
| 1.5.3 IGF-I 对牙鲆 IGFBP-3 和 IGFBP-4 的剂量和时间效应 | 第109页 |
| 1.5.4 IGF-II 对牙鲆 IGFBP-3 和 IGFBP-4 的剂量和时间效应 | 第109页 |
| 1.6 不同激素对 IGFBP-3 和 IGFBP-4 在牙鲆肝细胞中的表达分析 | 第109页 |
| 2 结果 | 第109-116页 |
| 2.1 牙鲆肝脏组织细胞的分离 | 第109-110页 |
| 2.2 原代培养细胞总 RNA 的提取 | 第110-111页 |
| 2.3 激素对牙鲆肝细胞 IGFBP-3 的表达调控 | 第111-112页 |
| 2.3.1 GH 对牙鲆肝细胞 IGFBP-3 的表达调控 | 第111页 |
| 2.3.2 胰岛素对牙鲆肝细胞 IGFBP-3 的表达调控 | 第111-112页 |
| 2.3.3 IGF-I 对牙鲆肝细胞 IGFBP-3 的表达调控 | 第112页 |
| 2.3.4 IGF-II 对牙鲆肝细胞 IGFBP-3 的表达调控 | 第112页 |
| 2.4 激素对牙鲆肝细胞 IGFBP-4 的表达调控 | 第112-116页 |
| 2.4.1 GH 对牙鲆肝细胞 IGFBP-4 的表达调控 | 第112页 |
| 2.4.2 胰岛素对牙鲆肝细胞 IGFBP-4 的表达调控 | 第112-113页 |
| 2.4.3 IGF-I 对牙鲆肝细胞 IGFBP-4 的表达调控 | 第113页 |
| 2.4.4 IGF-II 对牙鲆肝细胞 IGFBP-4 的表达调控 | 第113-116页 |
| 讨论 | 第116-119页 |
| 第六章 牙鲆 IGFBPs 基因启动子的克隆及序列分析 | 第119-128页 |
| 1 材料和方法 | 第119-123页 |
| 1.1 实验材料 | 第119页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第119页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第119页 |
| 1.2 实验所用引物 | 第119-120页 |
| 1.3 牙鲆基因组 DNA 的提取 | 第120页 |
| 1.4 染色体步移 | 第120-121页 |
| 1.5 牙鲆四种 IGFBP 基因启动子序列的获得 | 第121-122页 |
| 1.5.1 引物设计 | 第121页 |
| 1.5.2 牙鲆 IGFBP-4 基因启动子序列的克隆 | 第121-122页 |
| 1.6 牙鲆四种 IGFBP 基因启动子序列的生物信息学分析 | 第122-123页 |
| 2. 结果 | 第123-124页 |
| 2.1 牙鲆四种 IGFBP 基因启动子序列的获得 | 第123-124页 |
| 2.2 牙鲆四种 IGFBP 基因启动子序列的生物信息学分析 | 第124页 |
| 讨论 | 第124-128页 |
| 参考文献 | 第128-151页 |
| 个人简历 | 第151-152页 |
| 发表的学术论文 | 第152-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
