| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 插图和附表清单 | 第13-15页 |
| 縮略语表 | 第15-16页 |
| 1 引言 | 第16-32页 |
| 1.1 肌内脂肪的研究概况 | 第16页 |
| 1.2 肌内脂肪的沉积 | 第16-17页 |
| 1.2.1 肌内脂肪的合成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 肌内脂肪的分解 | 第17页 |
| 1.2.3 肌内脂肪的转运 | 第17页 |
| 1.3 肌内脂肪对羊肉品质的影响 | 第17-19页 |
| 1.3.1 肌内脂肪对大理石纹的影响 | 第18页 |
| 1.3.2 肌内脂肪对羊肉嫩度的影响 | 第18页 |
| 1.3.3 肌内脂肪对羊肉风味的影响 | 第18-19页 |
| 1.4 脂肪细胞研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4.1 脂肪细胞的起源 | 第19-20页 |
| 1.4.2 前体脂肪细胞的研究模型 | 第20-21页 |
| 1.4.3 前体脂肪细胞的培养 | 第21页 |
| 1.4.4 前体脂肪细胞的诱导分化 | 第21-22页 |
| 1.4.5 成熟脂肪细胞 | 第22页 |
| 1.5 脂肪细胞分化的转录调控 | 第22-24页 |
| 1.5.1 PPARs | 第22-24页 |
| 1.5.2 C/EBPs | 第24页 |
| 1.6 动物脂肪组织和肌内脂肪代谢关键基因的研究进展 | 第24-28页 |
| 1.6.1 HSL | 第24-25页 |
| 1.6.2 Lipin | 第25-26页 |
| 1.6.3 FTO | 第26-27页 |
| 1.6.4 LPL | 第27页 |
| 1.6.5 FABPs | 第27-28页 |
| 1.6.6 perilipin | 第28页 |
| 1.7 基因研究技术进展 | 第28-32页 |
| 1.7.1 基因功能研究技术 | 第28-30页 |
| 1.7.2 基因筛选技术 | 第30-32页 |
| 2 研究一：白绒山羊不同部位肌内脂肪含量与脂肪沉积关键基因相关性分析 | 第32-48页 |
| 2.1 试验材料 | 第32-34页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第32-33页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第33页 |
| 2.1.3 引物设计与合成 | 第33-34页 |
| 2.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 2.2.1 肌内脂肪含量的测定 | 第34页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.3 总RNA反转录合成cDNA | 第34-35页 |
| 2.2.4 脂肪沉积关键基因的克隆 | 第35页 |
| 2.2.5 脂肪沉积关键基因的实时定量检测 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-47页 |
| 2.3.1 绒山羊不同部位肌内脂肪含量 | 第35-36页 |
| 2.3.2 标准曲线的绘制 | 第36-38页 |
| 2.3.3 绒山羊不同部位脂肪沉积关键基因mRNA的表达变化 | 第38-40页 |
| 2.3.4 脂肪沉积关键基因相关性变化 | 第40页 |
| 2.3.5 脂肪沉积关键基因对肌内脂肪含量相关性分析 | 第40-41页 |
| 2.3.6 同一组织下不同基因表达的多重比较分析 | 第41-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 3 研究二：绒山羊肌内前体脂肪细胞的基因表达分析 | 第48-60页 |
| 3.1 试验材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第48页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第48-49页 |
| 3.2 试验方法 | 第49-51页 |
| 3.2.1 肌内前体脂肪细胞的分离培养 | 第49页 |
| 3.2.2 肌内前体脂肪细胞的传代培养 | 第49页 |
| 3.2.3 肌内前体脂肪细胞的诱导分化 | 第49-50页 |
| 3.2.4 细胞生长曲线的绘制 | 第50页 |
| 3.2.5 绒山羊肌内脂肪细胞的鉴定 | 第50页 |
| 3.2.6 细胞的冻存与复苏 | 第50页 |
| 3.2.7 引物设计 | 第50页 |
| 3.2.8 细胞总RNA的提取与检测 | 第50-51页 |
| 3.2.9 RT-PCR反应 | 第51页 |
| 3.3 结果与分析 | 第51-57页 |
| 3.3.1 绒山羊肌内前体脂肪细胞的形态学观察 | 第51-52页 |
| 3.3.2 山羊肌内前体脂肪细胞的传代培养 | 第52页 |
| 3.3.3 山羊肌内脂肪细胞的诱导分化及鉴定 | 第52-54页 |
| 3.3.4 肌内前体脂肪细胞的生长曲线 | 第54-55页 |
| 3.3.5 肌内前体脂肪细胞分化过程中成脂基因的表达 | 第55-56页 |
| 3.3.6 肌内前体脂肪细胞诱导过程中成脂基因的表达 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 3.4.1 构建白绒山羊肌内前体脂肪细胞体外培养体系 | 第57-58页 |
| 3.4.2 肌内前体脂肪细胞的增殖分化 | 第58-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 4 研究三：RNAi沉默PPARγ基因对绒山羊肌内脂肪细胞的影响 | 第60-77页 |
| 4.1 试验材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 细胞、质粒 | 第61页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第61-62页 |
| 4.2 试验方法 | 第62-66页 |
| 4.2.1 siRNA设计 | 第62-63页 |
| 4.2.2 shRNA寡核苷酸链的退火 | 第63页 |
| 4.2.3 PPARγ—shRNA表达载体的构建 | 第63页 |
| 4.2.4 慢病毒载体质粒pHBLV-U6-Puro的回收与扩增 | 第63-64页 |
| 4.2.5 pHBLV-U6-Puro大片段与发卡状结构PPARγ-shRNA的连接 | 第64页 |
| 4.2.6 转化和测序 | 第64页 |
| 4.2.7 慢病毒的包装和浓缩 | 第64页 |
| 4.2.8 目的细胞慢病毒感染 | 第64-65页 |
| 4.2.9 检测PPARγ的mRNA和蛋白表达水平 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-74页 |
| 4.3.1 酶切、测序结果 | 第66-68页 |
| 4.3.2 PPARγ-shRNA1、PPARγ-shRNA2、PPARγ-shRNA3干扰组转染293T细胞 | 第68-69页 |
| 4.3.3 慢病毒转染绒山羊肌内脂肪细胞 | 第69-70页 |
| 4.3.4 Real-time检测干扰后PPAR γ基因在脂肪细胞不同时间点的表达情况 | 第70页 |
| 4.3.5 WB检测干扰后PPARγ蛋白在脂肪细胞不同时间点的表达情况 | 第70-71页 |
| 4.3.6 下调PPARγ基因表达量对绒山羊肌内脂肪细胞增殖的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.7 下调PPARγ基因表达量对绒山羊肌内脂肪细胞分化的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.8 PPARγ基因表达量下降后其他成脂基因表达量的变化 | 第73-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74-77页 |
| 4.5 小结 | 第77页 |
| 5 研究四：绒山羊肌内脂肪细胞比较转录组分析 | 第77-101页 |
| 5.1 试验材料 | 第77-78页 |
| 5.1.1 试验样本 | 第78页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第78页 |
| 5.2 试验方法 | 第78-81页 |
| 5.2.1 样品RNA的提取 | 第78页 |
| 5.2.2 cDNA文库的制备 | 第78-79页 |
| 5.2.3 RNA-Seq文库测序 | 第79-80页 |
| 5.2.4 序列比对 | 第80页 |
| 5.2.5 转录本的构建及定量 | 第80页 |
| 5.2.6 基因差异表达分析 | 第80-81页 |
| 5.2.7 可变剪接分析 | 第81页 |
| 5.3 结果与分析 | 第81-96页 |
| 5.3.1 RNA提取与质量检测 | 第82-83页 |
| 5.3.2 与参考基因组对比分析 | 第83-84页 |
| 5.3.3 差异基因的筛选 | 第84-86页 |
| 5.3.4 差异表达基因GO分类 | 第86-92页 |
| 5.3.5 差异表达基因通路的富集 | 第92-95页 |
| 5.3.6 可变剪接 | 第95-96页 |
| 5.4 讨论 | 第96-101页 |
| 5.5 小结 | 第101页 |
| 6 结论 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-118页 |
| 作者简介 | 第118页 |
