| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 目录 | 第15-19页 |
| 1 绪论 | 第19-36页 |
| 1.1 中国桃种质资源起源演化和遗传多样性研究现状 | 第19-22页 |
| 1.1.1 中国桃的地理分布及品种群的划分 | 第19-20页 |
| 1.1.2 桃近缘野生种类型及桃起源演化关系 | 第20-21页 |
| 1.1.3 中国桃资源的遗传多样性研究现状 | 第21-22页 |
| 1.2 食物过敏和水果过敏概述 | 第22-25页 |
| 1.2.1 过敏反应的发生机理及分子基础 | 第22-23页 |
| 1.2.2 水果过敏的流行病学调查及研究现状 | 第23-24页 |
| 1.2.3 桃主要过敏原及桃过敏发生现状 | 第24-25页 |
| 1.2.4 水果过敏原差异表达研究现状 | 第25页 |
| 1.3 食物过敏原的检测和定量研究概况 | 第25-28页 |
| 1.3.1 过敏原的体内检测方法 | 第26页 |
| 1.3.2 过敏原的定量检测方法 | 第26-27页 |
| 1.3.3 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第27-28页 |
| 1.4 植物非特异性脂质转移蛋白 | 第28-36页 |
| 1.4.1 非特异性脂质转移蛋白的分类 | 第30页 |
| 1.4.2 非特异性脂质转移蛋白的结构 | 第30-31页 |
| 1.4.3 非特异性脂质转移蛋白的生物学功能 | 第31-36页 |
| 1.4.3.1 非特异性脂质转移蛋白的脂质转移活性 | 第31-32页 |
| 1.4.3.2 非特异性脂质转移蛋白的抗菌活性 | 第32-33页 |
| 1.4.3.3 非特异性脂质转移蛋白的抗逆性 | 第33页 |
| 1.4.3.4 非特异性脂质转移蛋白的致敏性 | 第33-36页 |
| 2 核果类水果及桃品种间脂质转移蛋白的基因多样性分析 | 第36-59页 |
| 2.1 引言 | 第36-37页 |
| 2.2 材料和方法 | 第37-43页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第37-40页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 2.2.2.1 DNA提取 | 第40页 |
| 2.2.2.2 DNA纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.2.3 引物设计 | 第41页 |
| 2.2.2.4 PCR反应程序和体系 | 第41-42页 |
| 2.2.2.5 PCR产物纯化、连接、转化和测序 | 第42页 |
| 2.2.2.6 序列分析 | 第42-43页 |
| 2.2.2.7 基于单核苷酸多态性标记的开发与应用 | 第43页 |
| 2.3 结果与分析 | 第43-55页 |
| 2.3.1 桃nsLTP基因及蛋白多样性 | 第43-47页 |
| 2.3.2 蔷薇科非特异性脂质转移蛋白的演化关系 | 第47-49页 |
| 2.3.3 桃及桃近缘野生种nsLTP基因上游区段的多态性分析 | 第49页 |
| 2.3.4 启动子的生物信息学分析 | 第49-51页 |
| 2.3.5 基于单核苷酸多态性标记 | 第51-55页 |
| 2.4 讨论 | 第55-58页 |
| 2.5 小结 | 第58-59页 |
| 3 桃nsLTP单克隆抗体的制备和鉴定 | 第59-76页 |
| 3.1 引言 | 第59-60页 |
| 3.2 材料和方法 | 第60-66页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 3.2.1.1 免疫原 | 第60页 |
| 3.2.1.2 实验动物和骨髓瘤细胞 | 第60页 |
| 3.2.1.3 主要试验试剂 | 第60页 |
| 3.2.1.4 主要实验仪器和耗材 | 第60-61页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第61-66页 |
| 3.2.2.1 抗原准备 | 第61页 |
| 3.2.2.2 重组蛋白免疫 | 第61-62页 |
| 3.2.2.3 小鼠血清效价和特异性检测 | 第62-63页 |
| 3.2.2.4 细胞融合 | 第63-64页 |
| 3.2.2.5 杂交瘤细胞的筛选 | 第64页 |
| 3.2.2.6 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第64页 |
| 3.2.2.7 腹水法进行杂交瘤细胞的扩大克隆 | 第64-65页 |
| 3.2.2.8 单克隆抗体纯化 | 第65页 |
| 3.2.2.9 单克隆抗体的鉴定 | 第65-66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-72页 |
| 3.3.1 免疫小鼠血清效价的测定 | 第66-67页 |
| 3.3.2 细胞融合和筛选结果 | 第67-69页 |
| 3.3.3 亚克隆结果 | 第69-70页 |
| 3.3.4 单克隆抗体效价 | 第70-71页 |
| 3.3.5 单克隆抗体蛋白亚型鉴定 | 第71页 |
| 3.3.6 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第71-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-74页 |
| 3.5 小结 | 第74-76页 |
| 4 基于桃nsLTP单克隆抗体夹心ELISA测定方法的建立 | 第76-89页 |
| 4.1 引言 | 第76页 |
| 4.2 材料和方法 | 第76-79页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第76-77页 |
| 4.2.1.1 植物材料 | 第76-77页 |
| 4.2.1.2 抗体材料 | 第77页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第77-79页 |
| 4.2.2.1 水果蛋白的提取 | 第77页 |
| 4.2.2.2 蛋白提取物总蛋白定量和SDS-PAGE检测 | 第77-78页 |
| 4.2.2.3 间接ELISA法检测单抗隆抗体的抗原最佳结合浓度 | 第78页 |
| 4.2.2.4 间接ELISA法检测单抗隆抗体的抗原结合特异性 | 第78页 |
| 4.2.2.5 生物素化单克隆抗体的制备 | 第78-79页 |
| 4.2.2.6 夹心ELISA单抗组合的筛选和标准曲线的测定 | 第79页 |
| 4.2.2.7 双夹心ELISA特异性检测 | 第79页 |
| 4.3 结果与分析 | 第79-86页 |
| 4.3.1 蛋白提取结果 | 第79-81页 |
| 4.3.2 单克隆抗体结合粗提蛋白最佳浓度 | 第81-82页 |
| 4.3.3 单克隆抗体的抗原结合特异性 | 第82-84页 |
| 4.3.4 单克隆抗体生物素标记结果 | 第84页 |
| 4.3.5 双单抗夹心ELISA单抗组合的筛选结果 | 第84-85页 |
| 4.3.6 双单抗夹心ELISA的特异性检测结果 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论和小结 | 第86-89页 |
| 5 桃脂质转移蛋白的定量及品种间表达差异分析 | 第89-99页 |
| 5.1 引言 | 第89页 |
| 5.2 材料和方法 | 第89-91页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第89页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第89-91页 |
| 5.2.1.1 蛋白提取 | 第89-90页 |
| 5.2.1.2 蛋白纯化 | 第90页 |
| 5.2.1.3 桃Prup3蛋白标准曲线的建立和最低检限阈值的确定 | 第90页 |
| 5.2.1.4 双夹心ELISA方法的精确度、准确度、重复性验证和抗体稳定性测试 | 第90-91页 |
| 5.3 结果与分析 | 第91-97页 |
| 5.3.1 蛋白提取物SDS-PAGE检测和总蛋白定量结果 | 第91-93页 |
| 5.3.2 蛋白纯化结果 | 第93-94页 |
| 5.3.3 桃Prup3蛋白标准曲线的确定 | 第94-95页 |
| 5.3.4 精确度、准确性和重复性验证 | 第95-96页 |
| 5.3.5 桃果皮和果肉中Prup3定量结果及差异比较 | 第96-97页 |
| 5.4 讨论和小结 | 第97-99页 |
| 6 小结与展望 | 第99-103页 |
| 6.1 结论 | 第99-101页 |
| 6.1.1 不同桃品种nsLTP基因多样性及启动子部分多态性分析 | 第99-100页 |
| 6.1.2 普通桃和桃近缘野生种nsLTPs的基因异同 | 第100页 |
| 6.1.3 抗桃nsLTP单克隆抗体制备 | 第100页 |
| 6.1.4 双单抗夹心ELISA检测桃Prup3体系的建立 | 第100-101页 |
| 6.1.5 不同品种桃的果皮和果肉中Prup3的测定和表达分析 | 第101页 |
| 6.2 主要创新点 | 第101-102页 |
| 6.3 展望 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-129页 |
| 作者简历及在学期间的科研成果 | 第129-130页 |
