| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第1章 前言 | 第9-35页 |
| 1.1 骨发生和骨重塑 | 第9-18页 |
| 1.1.1 概述 | 第9-13页 |
| 1.1.2 成骨细胞在骨形成中的作用 | 第13-15页 |
| 1.1.3 破骨细胞在骨吸收中的作用 | 第15-17页 |
| 1.1.4 成骨细胞对破骨细胞的调控作用 | 第17-18页 |
| 1.2 CHIP 的研究进展 | 第18-27页 |
| 1.2.1 CHIP：U-box 的泛素连接酶 E3 | 第18-22页 |
| 1.2.2 CHIP 在肿瘤发生发展中的作用 | 第22-24页 |
| 1.2.3 CHIP 敲除小鼠已知表型 | 第24-27页 |
| 1.3 TRAF6 的研究进展 | 第27-33页 |
| 1.3.1 TRAF6 蛋白的结构及功能 | 第27-28页 |
| 1.3.2 TRAF6 转录后调控 | 第28-31页 |
| 1.3.3 TRAF6 在破骨细胞形成及分化中的作用 | 第31-33页 |
| 1.3.4 TRAF6 在肿瘤中的作用 | 第33页 |
| 1.4 选题目的及意义 | 第33-35页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第35-50页 |
| 2.1 抗体与试剂 | 第35页 |
| 2.2 CHIP 基因敲除小鼠 | 第35页 |
| 2.3 细胞培养与小鼠原代骨髓细胞分离 | 第35-37页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第35页 |
| 2.3.2 细胞转染 | 第35-36页 |
| 2.3.3 稳定细胞系的建立 | 第36页 |
| 2.3.4 小鼠骨髓细胞的分离 | 第36-37页 |
| 2.4 分子生物实验方法 | 第37-45页 |
| 2.4.1 质粒来源及构建 | 第37页 |
| 2.4.2 引物信息 | 第37-38页 |
| 2.4.3 RNA 提取及 cDNA 反转录 | 第38-39页 |
| 2.4.4 Western Blotting | 第39-40页 |
| 2.4.5 荧光素酶报告实验 | 第40-41页 |
| 2.4.6 体外泛素化实验 | 第41-42页 |
| 2.4.7 核质分离 | 第42页 |
| 2.4.8 GST 蛋白纯化 | 第42-43页 |
| 2.4.9 GST pull-down | 第43-44页 |
| 2.4.10 免疫共沉淀（Immunoprecipitation，IP） | 第44页 |
| 2.4.11 细胞免疫荧光染色 | 第44-45页 |
| 2.4.12 MTT 实验 | 第45页 |
| 2.5 分析小鼠骨表型的相关实验方法 | 第45-50页 |
| 2.5.1 小鼠 X 射线检测 | 第45页 |
| 2.5.2 Micro-CT 检测 | 第45-46页 |
| 2.5.3 小鼠骨骼染色（Skeleton Staining） | 第46-47页 |
| 2.5.4 H&E 染色 | 第47页 |
| 2.5.5 钙黄绿素荧光双标实验（calcein labeling） | 第47页 |
| 2.5.6 抗酒石酸酸性磷酸酶染色（Tartrate-Resistant Acid Phosphatase, TRAP staining） | 第47-48页 |
| 2.5.7 骨吸收实验（Bone Resorption Assay） | 第48页 |
| 2.5.8 茜素红染色（Alizarin Red Staining）及碱性磷酸酶染色（Alkaline Phosphatase, ALP） | 第48-50页 |
| 第3章 CHIP 敲除小鼠的骨表型分析 | 第50-56页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 CHIP 敲除小鼠的体型减小且体重降低 | 第50-51页 |
| 3.3 CHIP 敲除小鼠骨密度降低 | 第51-52页 |
| 3.4 CHIP 敲除小鼠骨量减少 | 第52-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-56页 |
| 第4章 CHIP 在骨吸收中的作用 | 第56-71页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 CHIP 敲除小鼠破骨细胞形成增加 | 第56-58页 |
| 4.3 CHIP 敲除破骨细胞活性增加 | 第58-60页 |
| 4.4 CHIP 敲除破骨细胞中 TRAF2 以及 TRAF6 蛋白水平增加 | 第60页 |
| 4.5 TRAF6 是 CHIP 一个新底物 | 第60-63页 |
| 4.6 CHIP 与 TRAF6 相互作用 | 第63-65页 |
| 4.7 CHIP 促进 TRAF6 的泛素化 | 第65-67页 |
| 4.8 CHIP 抑制 TRAF6 介导的 NF-ΚB 信号通路 | 第67-69页 |
| 4.9 小结 | 第69-71页 |
| 第5章 CHIP 在骨形成中的作用 | 第71-77页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 CHIP 敲除小鼠骨矿化能力减弱 | 第71-72页 |
| 5.3 CHIP 敲除小鼠骨形成速率降低 | 第72页 |
| 5.4 CHIP 敲除成骨细胞的分化能力减弱 | 第72-73页 |
| 5.5 CHIP 敲除成骨细胞的活性降低 | 第73-75页 |
| 5.6 CHIP 影响骨形成机制的初步探索 | 第75页 |
| 5.7 小结 | 第75-77页 |
| 第6章 CHIP 在肝癌发生发展中的作用 | 第77-88页 |
| 6.1 引言 | 第77页 |
| 6.2 在肝癌细胞中 CHIP 促进 TRAF6 泛素化降解 | 第77-79页 |
| 6.3 在肝癌细胞中 CHIP 与 TRAF6 相互作用 | 第79-80页 |
| 6.4 在肝癌细胞中 CHIP 抑制 NF-ΚB 信号通路 | 第80-84页 |
| 6.5 CHIP 抑制 HEPG2 细胞的增殖 | 第84-86页 |
| 6.6 小结 | 第86-88页 |
| 第7章 总结与讨论 | 第88-93页 |
| 7.1 研究总结 | 第88页 |
| 7.2 讨论 | 第88-93页 |
| 7.2.1 导致 Chip 敲除小鼠体型减小的其他可能机制的讨论 | 第88-90页 |
| 7.2.2 在破骨细胞中 CHIP 的表达 | 第90-91页 |
| 7.2.3 CHIP 在成骨细胞中的底物探讨 | 第91页 |
| 7.2.4 CHIP 对 NF-κB 信号通路的影响 | 第91-92页 |
| 7.2.5 TRAF6 的转录后调控 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 个人简历、在学期间发表的论文及研究成果 | 第107-108页 |
