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谷氨酸棒杆菌无痕基因修饰系统的构建

摘要第4-5页
ABSTRACT第5-6页
第一章 文献综述第9-21页
    1.1 谷氨酸棒杆菌第9-12页
        1.1.1 谷氨酸棒杆菌的生物特性第9页
        1.1.2 谷氨酸棒杆菌的广泛应用第9-12页
    1.2 谷氨酸棒杆菌中基因修饰技术的研究现状第12-14页
        1.2.1 基因修饰技术第12-13页
        1.2.2 基因组修饰技术第13-14页
    1.3 基于双链断裂的基因编辑技术第14-17页
        1.3.1 基于双链断裂的基因编辑技术的研究现状第14-17页
        1.3.2 I-SceI核酸内切酶的应用第17页
    1.4 Red/ET重组第17-19页
    1.5 选题背景与研究思路第19-21页
        1.5.1 选题背景第19页
        1.5.2 研究思路与技术路线第19-21页
第二章 材料与方法第21-37页
    2.1 实验材料第21-27页
        2.1.1 实验菌株、质粒与培养条件第21-24页
        2.1.2 工具酶及试剂第24页
        2.1.3 主要溶液第24-26页
        2.1.4 主要仪器第26-27页
    2.2 基本操作技术第27-35页
        2.2.1 质粒及基因组DNA的提取第27-28页
        2.2.2 PCR反应体系及反应条件第28-29页
        2.2.3 CPEC反应体系及条件第29-30页
        2.2.4 酶切与连接第30-31页
        2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第31-34页
        2.2.6 谷氨酸棒杆菌感受态细胞的制备及转化第34-35页
    2.3 单交换重组体的筛选第35-36页
    2.4 双交换重组体的筛选第36-37页
第三章 结果与讨论第37-64页
    3.1 upp基因的敲除及其作为负筛选标记有效性分析第37-42页
        3.1.1 敲除质粒pDsacB-Δupp的构建第37-39页
        3.1.2 谷氨酸棒杆菌upp基因敲除菌株的构建第39-40页
        3.1.3 5-FU筛选浓度的确定第40-42页
    3.2 通用载体的构建第42-51页
        3.2.1 单交换通用载体的构建第42-43页
        3.2.2 双交换重组通用载体的构建第43-45页
        3.2.3 辅助表达质粒pEC-XK99E-SceI-recET的构建第45-51页
    3.3 upp与sacB的负筛选效率比较第51-54页
        3.3.1 基因单交换重组的ldhA基因敲除载体的构建第51-53页
        3.3.2 负筛选效率分析第53-54页
    3.4 双交换重组系统的构建第54-64页
        3.4.1 双交换重组载体的构建第54-56页
        3.4.2 双交换敲除载体的应用第56-59页
        3.4.3 IPTG诱导I-SceI表达的诱导浓度及时间的确定第59-60页
        3.4.4 基于PCR片段的双交换重组第60-63页
        3.4.5 辅助质粒pEC-XK99E-SceI-recET的消除第63-64页
第四章 结论与展望第64-66页
    4.1 结论第64页
    4.2 展望第64-66页
参考文献第66-72页
发表论文和参加科研情况说明第72-73页
致谢第73-74页

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