| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 文献综述 黏附侵袭性大肠杆菌鞭毛、菌毛结构及其致病性研究进展 | 第11-24页 |
| 1 AIEC | 第11-12页 |
| 2 鞭毛、菌毛的结构形态及相关生物学特性 | 第12-13页 |
| 3 AIEC致病性 | 第13-18页 |
| 3.1 生物被膜形成 | 第13-14页 |
| 3.2 黏附、侵袭 | 第14-15页 |
| 3.3 免疫调节 | 第15-18页 |
| 4 其它相关毒力因子 | 第18页 |
| 5 小结 | 第18-20页 |
| 参考文献 | 第20-24页 |
| 试验研究 | 第24-66页 |
| 研究一、LF82鞭毛亚单位基因fliC、Ⅰ型菌毛亚单位基因fimH缺失株及相应回补株的构建 | 第24-42页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第26页 |
| 1.2 培养基、主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-32页 |
| 2.1 fliC、fimH基因缺失引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2 融合PCR产物的制备与纯化 | 第28-29页 |
| 2.3 感受态细胞制备过程、电化学转化过程 | 第29-30页 |
| 2.3.1 电转化感受态细胞制备 | 第29页 |
| 2.3.2 质粒pKD46的电转化过程 | 第29页 |
| 2.3.3 Red同源重组酶诱导、感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.4 氯霉素抗性基因cat PCR产物的电转化过程 | 第30页 |
| 2.5 一次同源重组菌△fliC::cat、△fimH::cat、△fliC△fimH::cat PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 2.6 FLP位点专一性重组 | 第31页 |
| 2.7 二次重组菌△fliC、△fimH、△fliC△fimH的鉴定 | 第31页 |
| 2.8 回补株的构建 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-39页 |
| 3.1 融合PCR产物 | 第32页 |
| 3.2 一次同源重组菌△fliC::cat、△fimH:cat、△fliC△fimH::cat的PCR鉴定 | 第32-34页 |
| 3.3 二次重组菌△fliC、△fimH、△fliC△fimH的鉴定 | 第34-37页 |
| 3.4 回补株的构建 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-42页 |
| 研究二、LF82鞭毛蛋白FliC、Ⅰ型菌毛主要亚单位FimH介导的相关功能探索 | 第42-66页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1 菌株、质粒、细胞系 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂及其配用方法 | 第44页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 1.4 实验动物 | 第45页 |
| 2. 方法 | 第45-51页 |
| 2.1 生长曲线测定 | 第45页 |
| 2.2 半固体运动试验 | 第45页 |
| 2.3 生物被膜定量试验 | 第45-46页 |
| 2.4 Caco-2细胞黏附、侵袭试验 | 第46-47页 |
| 2.4.1 Caco-2细胞的培养、传代方法 | 第46页 |
| 2.4.2 Caco-2细胞黏附试验 | 第46页 |
| 2.4.3 Caco-2细胞侵袭试验 | 第46-47页 |
| 2.5 Caco-2细胞黏附抑制试验 | 第47页 |
| 2.6 Real-time PCR定量分析试验 | 第47-50页 |
| 2.6.1 细菌总RNA的提取方法 | 第47页 |
| 2.6.2 基因组DNA的去除方法 | 第47-48页 |
| 2.6.3 反转录过程 | 第48页 |
| 2.6.4 Real-time PCR | 第48-50页 |
| 2.6.5 数据的分析、处理 | 第50页 |
| 2.7 小鼠肠道细菌定植试验 | 第50-51页 |
| 2.7.1 实验动物 | 第50页 |
| 2.7.2 细菌培养与计数 | 第50-51页 |
| 2.7.3 小鼠肠道细菌定植试验具体方法 | 第51页 |
| 2.7.4 数据处理分析 | 第51页 |
| 3. 结果 | 第51-60页 |
| 3.1 生长曲线测定结果分析 | 第51-52页 |
| 3.2 细菌运动性鉴定结果 | 第52-54页 |
| 3.3 生物被膜定量试验结果数据分析 | 第54页 |
| 3.4 Caco-2细胞黏附试验结果分析 | 第54-55页 |
| 3.5 Caco-2细胞侵袭试验结果分析 | 第55-56页 |
| 3.6 Caco-2细胞黏附抑制试验结果分析 | 第56-57页 |
| 3.7 fliC和fimH缺失对其他毒力因子表达的影响 | 第57-58页 |
| 3.8 小鼠肠道定植试验 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 全文小结 | 第66-67页 |
| 论文创新点 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69-70页 |
