| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 MAVS介导的抗病毒先天性免疫 | 第11-13页 |
| 1.2 线粒体介导的抗病毒先天性免疫 | 第13-15页 |
| 1.2.1 NLRP3 | 第13页 |
| 1.2.2 TLRs | 第13-14页 |
| 1.2.3 NLRX1 | 第14页 |
| 1.2.4 IRGM | 第14-15页 |
| 1.3 线粒体DNA对先天性免疫的调节 | 第15-16页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 鹅MAVS相关基因的克隆及序列分析 | 第17-25页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 动物材料 | 第17页 |
| 2.1.2 病毒与菌株 | 第17页 |
| 2.1.3 试剂与载体 | 第17页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.5 主要试剂配制 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 GEF的制备 | 第18页 |
| 2.2.2 细胞RNA的提取及反转录 | 第18-19页 |
| 2.2.3 鹅MAVS基因的扩增及其真核表达质粒的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.4 正常鹅各组织内MAVS的mRNA水平检测 | 第20页 |
| 2.3 绪果 | 第20-24页 |
| 2.3.1 鹅MAVS基因overlap扩增结果 | 第20-21页 |
| 2.3.2 鹅MAVS基因真核表达质粒鉴定 | 第21页 |
| 2.3.3 鹅MAVS基因序列分析 | 第21-22页 |
| 2.3.4 MAVS序列进化分析 | 第22-23页 |
| 2.3.5 MAVS在正常鹅体内的分布 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 鹅MAVS在GEF中激活干扰素信号途径 | 第25-32页 |
| 3.1 材料 | 第25-26页 |
| 3.1.1 细胞系与质粒 | 第25页 |
| 3.1.2 试剂与抗体 | 第25页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-29页 |
| 3.2.1 HEK-293T细胞转染hMAVS、cMAVS和gMAVS | 第26页 |
| 3.2.2 Western-blot检测hMAVS、cMAVS和gMAVS的蛋白表达 | 第26-27页 |
| 3.2.3 细胞内总RNA提取与Real-time PCR | 第27-28页 |
| 3.2.4 双荧光素酶报告基因检测 | 第28-29页 |
| 3.3 结果 | 第29-31页 |
| 3.3.1 hMAVS、cMAVS和gMAVS在293T细胞中稳定表达 | 第29页 |
| 3.3.2 hMAVS、cMAVS和gMAVS在GEF中对其ISGs转录水平的影响 | 第29-30页 |
| 3.3.3 hMAVS、cMAVS和gMAVS在293T中对其ISGs转录水平的影响 | 第30页 |
| 3.3.4 hMAVS、cMAVS和gMAVS在293T中对人源IFN-β和ISRE启动子活性的影响 | 第30-31页 |
| 3.3.5 hMAVS、cMAVS和gMAVS在DF-1中对鸡源IFN-β和IRF-7启动子活性的影响 | 第31页 |
| 3.4 讨论 | 第31-32页 |
| 第四章 鹅MAVS各功能结构域的缺失对MAVS介导干扰素通路激活的影响 | 第32-42页 |
| 4.1 材料 | 第32-34页 |
| 4.1.1 细胞与质粒 | 第32页 |
| 4.1.2 试剂与抗体 | 第32-33页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 4.2 方法 | 第34-37页 |
| 4.2.1 构建gMAVS缺失CARD、TM、PRR、DM1、DM2区的质粒 | 第34页 |
| 4.2.2 Western-blot检测一系列gMAVS缺失质粒的蛋白表达 | 第34-35页 |
| 4.2.3 GEF内总RNA提取与Real-time PCR | 第35-36页 |
| 4.2.4 免疫共沉淀(CO-IP) | 第36-37页 |
| 4.3 结果 | 第37-41页 |
| 4.3.1 鹅MAVS基因真核表达质粒鉴定 | 第37页 |
| 4.3.2 ΔCARD、ATM、APRR、ADM1和ADM2在GEF中稳定表达 | 第37-39页 |
| 4.3.3 gMAVS的CARD、TM和PRR区对下游ISGs转录水平的影响 | 第39页 |
| 4.3.4 gMAVS的DM1和DM2区对下游ISGs转录水平的影响 | 第39-40页 |
| 4.3.5 gMAVS的CARD区、TM区和PRR区对RIG-I互作的影响 | 第40-41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 鹅MAVS对新城疫病毒复制的影响 | 第42-47页 |
| 5.1 材料 | 第42-43页 |
| 5.1.1 细胞系与质粒 | 第42页 |
| 5.1.2 毒株 | 第42页 |
| 5.1.3 试剂与抗体 | 第42页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第42-43页 |
| 5.2 方法 | 第43-44页 |
| 5.2.1 GEF转染gMAVS质粒 | 第43页 |
| 5.2.2 NDV Herts/33感染GEF | 第43页 |
| 5.2.3 细胞内总RNA提取与Real-time PCR | 第43-44页 |
| 5.3 结果 | 第44-46页 |
| 5.3.1 在GEF中过表达gMAVS后上调其转录水平 | 第44-45页 |
| 5.3.2 gMAVS在GEF中对NDV NP转录水平的影响 | 第45页 |
| 5.3.3 gMAVS在GEF感染NDV后对下游ISGs转录水平的影响 | 第45-46页 |
| 5.4 讨论 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第54-55页 |
