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禽大肠杆菌ETT2相关基因缺失株的构建及相关蛋白的表达与鉴定

中文摘要第2-4页
Abstract第4-5页
符号说明第9-10页
文献综述第10-19页
    1 大肠杆菌简介第10-15页
        1.1 禽大肠杆菌第10-11页
        1.2 禽大肠杆菌毒力因子研究进展第11-15页
    2 Ⅲ型分泌系统概况第15-17页
        2.1 TTSS简介第15页
        2.2 TTSS结构装置第15-16页
        2.3 TTSS在动物细胞中的效应机制第16-17页
    3 大肠杆菌Ⅲ型分泌系统第17-19页
        3.1 大肠杆菌Ⅲ型分泌系统1第17页
        3.2 大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2第17-19页
研究一: 禽源大肠杆菌ETT2 yqeH、yqeJ、yqeK基因的敲除第19-37页
    1 材料第19-23页
        1.1 菌株、质粒与引物第19-22页
        1.2 主要试剂第22页
        1.3 主要仪器第22-23页
        1.4 培养基第23页
    2 方法第23-29页
        2.1 携带完整型ETT2的禽源大肠杆菌的鉴定第23-24页
        2.2 ETT2yqeH、yqeJ、yqeK的基因替换第24-28页
        2.3 yqeH、yqeJ、yqeK重组菌抗性基因消除第28页
        2.4 FLPe表达质粒消除第28-29页
        2.5 yqeH、yqeJ、yqeK基因敲除株PCR鉴定第29页
    3 结果与分析第29-35页
        3.1 禽源大肠杆菌菌株PCR检测第29-31页
        3.2 禽源大肠杆菌的药物敏感性试验第31页
        3.3 带有同源臂的yqeH、yqeJ、yqeK基因扩增结果第31-32页
        3.4 pRed/ET质粒转化菌检测结果第32页
        3.5 含有FRT同源臂重组菌鉴定第32-33页
        3.6 yqeH、yqeJ、yqeK重组菌PCR鉴定第33-35页
        3.7 氯霉素抗性基因消除第35页
    4 讨论第35-37页
研究二: 禽源大肠杆菌ETT2 yqeH、yqeJ、yqeK的原核表达第37-48页
    1 材料第37-38页
        1.1 菌株、质粒与引物第37页
        1.2 主要试剂第37-38页
        1.3 主要仪器第38页
    2 方法第38-43页
        2.1 yqeH、yqeJ、yqeK基因扩增第38-39页
        2.2 yqeH、yqeJ、yqeK的重组质粒构建第39-41页
        2.3 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒检测第41页
        2.4 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒酶切分析第41页
        2.5 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒在大肠杆菌中分别表达第41-42页
        2.6 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK融合蛋白分别鉴定第42-43页
    3 结果与分析第43-46页
        3.1 yqeH、yqeJ、yqeK基因扩增结果第43-44页
        3.2 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒酶切鉴定第44页
        3.3 SDS-PAGE分别对His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK融合蛋白鉴定第44-45页
        3.5 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK融合蛋白Western-blot分析第45-46页
    4 讨论第46-48页
研究三: 禽源大肠杆菌ETT2 yqeH、yqeJ、yqeK抗体制备以及编码蛋白的鉴定第48-57页
    1 材料第48-49页
        1.1 菌株第48页
        1.2 主要仪器第48页
        1.3 试剂第48页
        1.4 实验动物第48-49页
    2 方法第49-51页
        2.1 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK 3个融合蛋制备第49页
        2.2 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗血清制备第49页
        2.3 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗体血清最佳稀释浓度确定第49-50页
        2.3 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗血清Western-blot分析第50页
        2.4 A130512菌株以及重组菌细菌裂解上清与沉淀制备第50页
        2.5 A130512和重组菌细菌裂解上清及沉淀分别与多抗血清Western-Blot分析第50-51页
    3 结果第51-55页
        3.1 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗血清的Western-blot分析第51-52页
        3.2 菌体裂解上清以及沉淀分别与多抗血清Western-Blot分析第52-55页
    4 讨论第55-57页
全文总结第57-58页
参考文献第58-65页
致谢第65-66页

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