中文摘要 | 第2-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
符号说明 | 第9-10页 |
文献综述 | 第10-19页 |
1 大肠杆菌简介 | 第10-15页 |
1.1 禽大肠杆菌 | 第10-11页 |
1.2 禽大肠杆菌毒力因子研究进展 | 第11-15页 |
2 Ⅲ型分泌系统概况 | 第15-17页 |
2.1 TTSS简介 | 第15页 |
2.2 TTSS结构装置 | 第15-16页 |
2.3 TTSS在动物细胞中的效应机制 | 第16-17页 |
3 大肠杆菌Ⅲ型分泌系统 | 第17-19页 |
3.1 大肠杆菌Ⅲ型分泌系统1 | 第17页 |
3.2 大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2 | 第17-19页 |
研究一: 禽源大肠杆菌ETT2 yqeH、yqeJ、yqeK基因的敲除 | 第19-37页 |
1 材料 | 第19-23页 |
1.1 菌株、质粒与引物 | 第19-22页 |
1.2 主要试剂 | 第22页 |
1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
1.4 培养基 | 第23页 |
2 方法 | 第23-29页 |
2.1 携带完整型ETT2的禽源大肠杆菌的鉴定 | 第23-24页 |
2.2 ETT2yqeH、yqeJ、yqeK的基因替换 | 第24-28页 |
2.3 yqeH、yqeJ、yqeK重组菌抗性基因消除 | 第28页 |
2.4 FLPe表达质粒消除 | 第28-29页 |
2.5 yqeH、yqeJ、yqeK基因敲除株PCR鉴定 | 第29页 |
3 结果与分析 | 第29-35页 |
3.1 禽源大肠杆菌菌株PCR检测 | 第29-31页 |
3.2 禽源大肠杆菌的药物敏感性试验 | 第31页 |
3.3 带有同源臂的yqeH、yqeJ、yqeK基因扩增结果 | 第31-32页 |
3.4 pRed/ET质粒转化菌检测结果 | 第32页 |
3.5 含有FRT同源臂重组菌鉴定 | 第32-33页 |
3.6 yqeH、yqeJ、yqeK重组菌PCR鉴定 | 第33-35页 |
3.7 氯霉素抗性基因消除 | 第35页 |
4 讨论 | 第35-37页 |
研究二: 禽源大肠杆菌ETT2 yqeH、yqeJ、yqeK的原核表达 | 第37-48页 |
1 材料 | 第37-38页 |
1.1 菌株、质粒与引物 | 第37页 |
1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
1.3 主要仪器 | 第38页 |
2 方法 | 第38-43页 |
2.1 yqeH、yqeJ、yqeK基因扩增 | 第38-39页 |
2.2 yqeH、yqeJ、yqeK的重组质粒构建 | 第39-41页 |
2.3 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒检测 | 第41页 |
2.4 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒酶切分析 | 第41页 |
2.5 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒在大肠杆菌中分别表达 | 第41-42页 |
2.6 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK融合蛋白分别鉴定 | 第42-43页 |
3 结果与分析 | 第43-46页 |
3.1 yqeH、yqeJ、yqeK基因扩增结果 | 第43-44页 |
3.2 yqeH、yqeJ、yqeK重组质粒酶切鉴定 | 第44页 |
3.3 SDS-PAGE分别对His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK融合蛋白鉴定 | 第44-45页 |
3.5 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK融合蛋白Western-blot分析 | 第45-46页 |
4 讨论 | 第46-48页 |
研究三: 禽源大肠杆菌ETT2 yqeH、yqeJ、yqeK抗体制备以及编码蛋白的鉴定 | 第48-57页 |
1 材料 | 第48-49页 |
1.1 菌株 | 第48页 |
1.2 主要仪器 | 第48页 |
1.3 试剂 | 第48页 |
1.4 实验动物 | 第48-49页 |
2 方法 | 第49-51页 |
2.1 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK 3个融合蛋制备 | 第49页 |
2.2 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗血清制备 | 第49页 |
2.3 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗体血清最佳稀释浓度确定 | 第49-50页 |
2.3 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗血清Western-blot分析 | 第50页 |
2.4 A130512菌株以及重组菌细菌裂解上清与沉淀制备 | 第50页 |
2.5 A130512和重组菌细菌裂解上清及沉淀分别与多抗血清Western-Blot分析 | 第50-51页 |
3 结果 | 第51-55页 |
3.1 His-YqeH、His-YqeJ、His-YqeK多抗血清的Western-blot分析 | 第51-52页 |
3.2 菌体裂解上清以及沉淀分别与多抗血清Western-Blot分析 | 第52-55页 |
4 讨论 | 第55-57页 |
全文总结 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-65页 |
致谢 | 第65-66页 |