| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 中文文摘 | 第6-11页 |
| 绪论 | 第11-19页 |
| 1 生物催化剂的底物多样性及多功能催化活性 | 第11-12页 |
| 1.1 底物多样性 | 第11页 |
| 1.2 多功能催化活性 | 第11-12页 |
| 1.3 底物多样性及多功能催化活性的开发及其具体应用 | 第12页 |
| 2 微生物脂肪酶概述 | 第12-14页 |
| 2.1 微生物脂肪酶活性中心的结构特点及其分类 | 第12-14页 |
| 2.2 微生物脂肪酶催化底物的多样性 | 第14页 |
| 3 微生物胆固醇酯酶 | 第14-16页 |
| 3.1 微生物胆固醇酯酶的应用 | 第14-15页 |
| 3.2 微生物胆固醇酯酶的结构特点 | 第15-16页 |
| 3.3 微生物脂肪酶与胆固醇酯酶的共性与差异 | 第16页 |
| 4 本课题的研究背景、内容及意义 | 第16-19页 |
| 第一章 Burkholderia sp. ZYB002脂肪酶LipA的纯化及脂肪酶基本酶学性质分析 | 第19-43页 |
| 1 前言 | 第19页 |
| 2 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1 试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 重组菌株 | 第20页 |
| 2.3 培养基及主要溶液的配置 | 第20-22页 |
| 2.4 设备 | 第22-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-30页 |
| 3.1 重组脂肪酶基因lipA的诱导表达 | 第23页 |
| 3.2 脂肪酶LipA的纯化 | 第23-24页 |
| 3.3 脂肪酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| 3.4 蛋白质含量的测定 | 第25-27页 |
| 3.5 LipA/LipB复合物分离条件的探索 | 第27-28页 |
| 3.6 重组脂肪酶LipA的酶学性质研究 | 第28-30页 |
| 4 结果和分析 | 第30-42页 |
| 4.1 标准曲线的制作 | 第30-31页 |
| 4.2 重组脂肪酶LipA的纯化 | 第31-33页 |
| 4.3 LipA/LipB复合物分离条件的摸索 | 第33-37页 |
| 4.4 重组脂肪酶LipA的酶学性质 | 第37-42页 |
| 5 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第二章 Burkholderia sp. ZYB002脂肪酶LipA的底物多样性分析、对应分子模型的构建及潜在突变位点的预测 | 第43-61页 |
| 1 前言 | 第43页 |
| 2 实验材料 | 第43-45页 |
| 2.1 试剂 | 第43-44页 |
| 2.2 重组菌株 | 第44页 |
| 2.3 主要溶液的配置 | 第44-45页 |
| 2.4 设备 | 第45页 |
| 3 实验方法 | 第45-52页 |
| 3.1 重组脂肪酶基因lipA的诱导表达 | 第45页 |
| 3.2 脂肪酶LipA的纯化 | 第45页 |
| 3.3 胆固醇酯酶酶活的测定 | 第45-50页 |
| 3.4 蛋白质含量的测定 | 第50-51页 |
| 3.5 脂肪酶-三酰甘油酯和脂肪酶-胆固醇酯过渡态复合物分子模型的构建 | 第51页 |
| 3.6 影响霍尔德菌脂肪酶LipA胆固醇酯酶活性的潜在突变位点的预测 | 第51-52页 |
| 4 结果与分析 | 第52-58页 |
| 4.1 标准曲线的绘制 | 第52-53页 |
| 4.2 伯克霍尔德菌脂肪酶LipA胆固醇酯酶活性的测定 | 第53-55页 |
| 4.3 分子模型的构建 | 第55-57页 |
| 4.4 潜在突变位点的分析 | 第57-58页 |
| 5 小结与讨论 | 第58-61页 |
| 第三章 Burkholderia sp. ZYB002脂肪酶LipA突变体的构建及突变体活性的初步分析 | 第61-75页 |
| 1 前言 | 第61页 |
| 2 实验材料 | 第61-63页 |
| 2.1 试剂 | 第61-62页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第62页 |
| 2.3 培养基及主要溶液的配置 | 第62-63页 |
| 2.4 设备 | 第63页 |
| 3 实验方法 | 第63-69页 |
| 3.1 SDS碱裂解法小量制备质粒pACYC-lpiA/lipB | 第63-64页 |
| 3.2 用氯化钙制备感受态大肠杆菌E.coli BL21(DE3) | 第64页 |
| 3.3 重叠延伸PCR以获得突变质粒 | 第64-66页 |
| 3.4 突变质粒的转化 | 第66页 |
| 3.5 突变质粒的阳性转化子的验证 | 第66-68页 |
| 3.6 突变体基因的诱导表达 | 第68页 |
| 3.7 重组脂肪酶LipA及其突变体的胆固醇酯酶酶活U/OD_(600)的测定 | 第68-69页 |
| 4 结果和分析 | 第69-74页 |
| 4.1 重组质粒的的提取 | 第69页 |
| 4.2 重叠延伸PCR以获得突变质粒 | 第69-70页 |
| 4.3 突变质粒的转化 | 第70页 |
| 4.4 突变质粒的阳性转化子的验证 | 第70-72页 |
| 4.5 重组脂肪酶LipA及其突变体的胆固醇酯酶酶活U/OD_(600)的测定结果 | 第72-74页 |
| 5 小结与讨论 | 第74-75页 |
| 第四章 结论与后续工作 | 第75-77页 |
| 1 结论 | 第75-76页 |
| 2 后续工作 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 个人简历 | 第91-95页 |
