| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-37页 |
| 第一章 抗菌肽的分类、功能及应用前景展望 | 第16-27页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 1 抗菌肽的来源 | 第17-19页 |
| 1.1 昆虫来源的抗菌肽 | 第17-18页 |
| 1.2 来源于其他动物的抗菌肽 | 第18页 |
| 1.3 来源于化学合成的抗菌肽 | 第18-19页 |
| 1.4 来源于基因工程菌表达的抗菌肽 | 第19页 |
| 2 抗菌肽的不同功能 | 第19-21页 |
| 2.1 抗细菌 | 第19-20页 |
| 2.2 抗真菌 | 第20页 |
| 2.3 抗寄生虫 | 第20页 |
| 2.4 抗病毒 | 第20-21页 |
| 2.5 抗肿瘤细胞 | 第21页 |
| 3 抗菌肽的应用前景 | 第21-22页 |
| 3.1 在医药工业中的应用 | 第21-22页 |
| 3.2 在食品添加剂中的应用 | 第22页 |
| 4 展望 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 第二章 抗菌肽抗肿瘤作用的研究进展 | 第27-37页 |
| 引言 | 第27-28页 |
| 1 具有抗癌活性的抗菌肽的分类和选择性 | 第28页 |
| 2 抗菌肽对各类肿瘤细胞的抗肿瘤作用 | 第28-30页 |
| 2.1 实体瘤 | 第29页 |
| 2.2 非实体瘤 | 第29-30页 |
| 3 抗菌肽的抗肿瘤作用机制 | 第30-33页 |
| 3.1 膜裂解机制 | 第30-31页 |
| 3.2 坏死和凋亡机制 | 第31页 |
| 3.3 多重作用模式 | 第31-33页 |
| 4 抗菌肽作为抗癌多肽的设计与发展 | 第33页 |
| 5 抗菌肽作为抗癌药物的前景展望及存在的问题 | 第33页 |
| 参考文献 | 第33-37页 |
| 第二部分 新疆家蚕抗菌肽的优化表达及活性检测研究 | 第37-74页 |
| 第一章 新疆家蚕抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达和功能分析 | 第37-55页 |
| 1 材料与方法 | 第39-43页 |
| 1.1 材料 | 第39页 |
| 1.2 重组表达载体的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 1.3 CecropinXJ融合蛋白的原核表达及Tricine-SDS-PAGE电泳检测 | 第40页 |
| 1.4 CecropinXJ融合蛋白诱导表达条件的优化试验 | 第40-41页 |
| 1.5 重组蛋白His-CecropinXJ的纯化 | 第41页 |
| 1.6 重组蛋白His-CecropinXJ的蛋白印迹分析 | 第41-42页 |
| 1.7 抗细菌活性分析 | 第42页 |
| 1.8 抗真菌活性分析 | 第42-43页 |
| 1.9 溶血活性检测 | 第43页 |
| 1.10 CecropinXJ对pH和温度稳定性检测 | 第43页 |
| 1.11 数据分析 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-50页 |
| 2.1 不同重组表达载体转化大肠杆菌CecropinXJ蛋白的表达情况 | 第43-44页 |
| 2.2 CecropinXJ融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第44-46页 |
| 2.3 CecropinXJ融合蛋白的亲和纯化 | 第46-47页 |
| 2.4 抗细菌活性检测 | 第47-48页 |
| 2.5 抗真菌活性检测 | 第48页 |
| 2.6 温度和pH稳定性 | 第48-49页 |
| 2.7 溶血活性检测 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 第二章 新疆家蚕抗菌肽在酿酒酵母中的表达及性质研究 | 第55-74页 |
| 1 材料与方法 | 第57-62页 |
| 1.1 菌株 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 1.3 pYES2/CT/α FactorCecropinXJ重组质粒的构建及鉴定 | 第57-61页 |
| 1.4 重组蛋白的表达 | 第61页 |
| 1.5 重组蛋白的纯化 | 第61页 |
| 1.6 重组抗菌肽CecropinXJ的蛋白印迹分析 | 第61页 |
| 1.7 抑菌活性分析 | 第61-62页 |
| 1.8 透射电镜分析 | 第62页 |
| 1.9 溶血活性检测 | 第62页 |
| 1.10 CecropinXJ的稳定性检测 | 第62页 |
| 1.11 系统发育分析 | 第62页 |
| 1.12 数据统计 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-69页 |
| 2.1 pYES2/CT/α Factor-CecropinXJ真核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 2.2 系统发育分析 | 第63-64页 |
| 2.3 重组蛋白His-CecropinXJ的纯化和表达 | 第64-65页 |
| 2.4 抗菌活性分析 | 第65-66页 |
| 2.5 透射电子显微镜 | 第66-68页 |
| 2.6 溶血活性分析 | 第68页 |
| 2.7 温度和pH稳定性 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 第三部分 新疆家蚕抗菌肽对人食管癌细胞体内外抗肿瘤作用机制研究 | 第74-155页 |
| 第一章 新疆家蚕抗菌肽对人食管癌细胞骨架的影响 | 第74-91页 |
| 1 材料与方法 | 第75-82页 |
| 1.1 实验材料 | 第75-76页 |
| 1.2 实验方法 | 第76-82页 |
| 1.2.1 扫描电镜观察细胞亚显微结构 | 第76页 |
| 1.2.2 划痕实验 | 第76页 |
| 1.2.3 侵袭实验 | 第76-77页 |
| 1.2.4 免疫荧光 | 第77页 |
| 1.2.5 Western Blot检测 | 第77页 |
| 1.2.6 Quantitative real-time PCR分析α-actin, β-actin, γ-actin, α-tubulin,β-tubulin的基因表达 | 第77-82页 |
| 1.2.7 统计分析 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-88页 |
| 2.1 CecropinXJ对Eca109细胞骨架的损伤作用 | 第82-83页 |
| 2.2 CecropinXJ抑制Eca109细胞迁移和侵袭 | 第83-84页 |
| 2.3 CecropinXJ破坏Eca109细胞的微管和微丝结构 | 第84-86页 |
| 2.4 CecropinXJ影响Eca109细胞骨架蛋白的表达 | 第86页 |
| 2.5 Cecropin XJ影响Eca109细胞骨架蛋白亚型基因的表达 | 第86-88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 第二章 新疆家蚕抗菌肽诱导人食管癌细胞凋亡及其机制的研究 | 第91-115页 |
| 1 材料与方法 | 第93-97页 |
| 1.1 实验材料 | 第93-94页 |
| 1.2 实验方法 | 第94-97页 |
| 1.2.1 MTT法体外检测抗增殖活性 | 第94页 |
| 1.2.2 琼脂糖集落实验 | 第94页 |
| 1.2.3 Hoechst 33258荧光染色观察细胞形态 | 第94-95页 |
| 1.2.4 扫描电镜观察细胞亚显微结构 | 第95页 |
| 1.2.5 透射电镜观察细胞亚显微结构 | 第95页 |
| 1.2.6 Annenxin V/PI双染色法检测细胞凋亡 | 第95页 |
| 1.2.7 细胞凋亡周期的检测 | 第95页 |
| 1.2.8 LDH活性检测细胞的坏死率及凋亡率 | 第95-96页 |
| 1.2.9 线粒体膜电位(△Ψm)检测 | 第96页 |
| 1.2.10 细胞内活性氧(ROS)含量测定 | 第96页 |
| 1.2.11 Western Blot检测 | 第96-97页 |
| 1.2.12 荷瘤裸鼠模型的建立 | 第97页 |
| 1.2.13 裸鼠体内抑瘤作用的检测 | 第97页 |
| 1.2.14 统计分析 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-107页 |
| 2.1 新疆家蚕抗菌肽诱导人食管癌细胞凋亡的作用 | 第97-103页 |
| 2.1.1 CecropinXJ对Eca109细胞的抗增殖作用 | 第98-99页 |
| 2.1.2 凋亡细胞亚显微结构变化 | 第99-100页 |
| 2.1.3 荧光显微镜观察细胞的形态变化 | 第100-101页 |
| 2.1.4 流式细胞仪法对细胞凋亡的检测 | 第101-102页 |
| 2.1.5 细胞周期的变化 | 第102-103页 |
| 2.1.6 细胞LDH乳酸脱氢酶含量变化 | 第103页 |
| 2.2 新疆家蚕抗菌肽诱导人食管癌细胞凋亡机制的探索 | 第103-107页 |
| 2.2.1 CecropinXJ导致Eca109细胞线粒体膜电位下降 | 第103-104页 |
| 2.2.2 CecropinXJ导致Eca109细胞内活性氧水平升高 | 第104-105页 |
| 2.2.3 CecropinXJ对Eca109细胞caspase家族蛋白表达的影响 | 第105-106页 |
| 2.2.4 CecropinXJ对Eca109细胞Bax家族蛋白表达的影响 | 第106页 |
| 2.2.5 CecropinXJ对Eca109细胞周期相关蛋白表达的影响 | 第106-107页 |
| 3 CecropinXJ抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长 | 第107-110页 |
| 4 讨论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-115页 |
| 第三章 新疆家蚕抗菌肽对荷瘤小鼠免疫系统的影响 | 第115-132页 |
| 1 材料与方法 | 第117-122页 |
| 1.1 细胞系 | 第117页 |
| 1.2 实验动物 | 第117页 |
| 1.3 主要试剂 | 第117-118页 |
| 1.4 肿瘤细胞的获取及荷瘤鼠模型建立 | 第118页 |
| 1.5 动物分组和干预方案 | 第118页 |
| 1.6 瘤重与瘤体积的测量 | 第118页 |
| 1.8 制备肿瘤组织切片 | 第118页 |
| 1.9 免疫组化检测凋亡相关细胞因子的表达 | 第118-119页 |
| 1.10 T细胞增殖 | 第119-120页 |
| 1.11 细胞因子染色 | 第120-121页 |
| 1.12 流式细胞术检测DCs表面分子 | 第121页 |
| 1.13 抗菌肽对荷瘤小鼠TNF-α细胞因子分泌的影响 | 第121-122页 |
| 1.14 统计学分析 | 第122页 |
| 2 结果与分析 | 第122-129页 |
| 2.1 抗菌肽CecropinXJ对BALB/c荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用 | 第122-123页 |
| 2.2 CecropinXJ对小鼠肿瘤和脏器病理学检测 | 第123-125页 |
| 2.3 CecropinXJ下调小鼠肿瘤组织中VEGF、bFGF并诱导瘤内细胞凋亡 | 第125-126页 |
| 2.4 CecropinXJ对荷瘤小鼠脾细胞诱导增殖的影响 | 第126页 |
| 2.5 CecropinXJ作用荷瘤小鼠过程中体内细胞因子的表达情况 | 第126-127页 |
| 2.6 CecropinXJ作用荷瘤小鼠过程中脾脏中DCs表面分子的表达情况 | 第127-128页 |
| 2.7 CecropinXJ对荷瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响 | 第128-129页 |
| 3 讨论 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-132页 |
| 第四章 新疆家蚕抗菌肽联合多种化疗药物对人食管癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第132-144页 |
| 1 材料与方法 | 第133-136页 |
| 1.1 材料 | 第134页 |
| 1.2 方法 | 第134-136页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第134页 |
| 1.2.2 MTT法检测细胞增殖抑制 | 第134-135页 |
| 1.2.3 Annexin V-FITC/ PI检测细胞凋亡 | 第135页 |
| 1.2.4 DCFH-DA检测细胞内活性氧水平 | 第135页 |
| 1.2.5 DiOC_6 (3)染色检测细胞线粒体膜电位 | 第135-136页 |
| 2 结果与分析 | 第136-140页 |
| 2.1 不同浓度抗菌肽与化疗药物联用对Eca109细胞抑制率的影响 | 第136-137页 |
| 2.2 抗菌肽与化疗药物联用对Eca109细胞凋亡的影响 | 第137-138页 |
| 2.3 抗菌肽与化疗药物联用对Eca109细胞内活性氧水平的影响 | 第138-139页 |
| 2.4 抗菌肽与化疗药物联用对Eca109细胞内线粒体膜电位的影响 | 第139-140页 |
| 3 讨论 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-144页 |
| 第五章 新疆家蚕抗菌肽在人食管癌细胞中的定位分析 | 第144-155页 |
| 1 材料与方法 | 第145-149页 |
| 1.1 实验材料 | 第145页 |
| 1.2 实验方法 | 第145-149页 |
| 1.2.1 重组质粒pcDNA3.0-CecropinXJ的构建 | 第145-147页 |
| 1.2.2 重组质粒肝脏转染及表达检测 | 第147-148页 |
| 1.2.3 重组质粒肌肉注射免疫小鼠 | 第148页 |
| 1.2.4 抗体检测 | 第148-149页 |
| 1.2.5 免疫荧光检测 | 第149页 |
| 2 结果 | 第149-152页 |
| 2.1 pcDNA3.0-CecropinXJ真核表达载体的构建 | 第149页 |
| 2.2 重组质粒pcDNA3.0-cecropinXJ质粒在小鼠肝脏内的表达 | 第149-150页 |
| 2.3 鼠抗CecropinXJ血清抗体效价 | 第150-151页 |
| 2.4 免疫血清与变性抗原的结合特异性 | 第151页 |
| 2.5 抗菌肽在肿瘤细胞中的定位 | 第151-152页 |
| 3 讨论 | 第152-153页 |
| 参考文献 | 第153-155页 |
| 第四部分 结论与展望 | 第155-157页 |
| 附录1 英文缩略语 | 第157-158页 |
| 附录2 主要实验仪器 | 第158-159页 |
| 博士期间已发表论文 | 第159-160页 |
| 致谢 | 第160-161页 |
| 个人简介 | 第161-162页 |
