| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| 1.1 蒽环类抗生素概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 蒽环类化合物的发现 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蒽环类抗生素的结构与功能 | 第15-17页 |
| 1.2 阿霉素的研究进展 | 第17-26页 |
| 1.2.1 阿霉素的作用机制 | 第17-22页 |
| 1.2.2 阿霉素的代谢 | 第22-23页 |
| 1.2.3 阿霉素的心脏毒性 | 第23-24页 |
| 1.2.4 阿霉素耐药 | 第24-26页 |
| 1.3 CMPK1的研究进展 | 第26-29页 |
| 1.3.1 CMPK1的结构 | 第27页 |
| 1.3.2 CMPK1的功能 | 第27-28页 |
| 1.3.3 CMPK1与耐药 | 第28-29页 |
| 1.4 研究背景及研究内容 | 第29-32页 |
| 1.4.1 研究背景及立题依据 | 第29页 |
| 1.4.2 研究基础 | 第29-30页 |
| 1.4.3 本研究的主要内容 | 第30-32页 |
| 第二章 阿霉素生物素化探针的合成及验证 | 第32-47页 |
| 2.1 前言 | 第32-33页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第33页 |
| 2.2.3 实验仪器及耗材 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-39页 |
| 2.3.0 六碳链生物素化ADM的制备 | 第34-36页 |
| 2.3.1 生物素化ADM的HPLC检测 | 第36页 |
| 2.3.2 生物素化ADM与亲和素结合能力检测 | 第36页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第36-37页 |
| 2.3.4 细胞药敏性检测 | 第37页 |
| 2.3.5 激光共聚焦分析 | 第37-38页 |
| 2.3.6 生物素化ADM与蛋白芯片的反应 | 第38页 |
| 2.3.7 SAM（Significant analysis of microarray）分析 | 第38页 |
| 2.3.8 统计学分析 | 第38-39页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第39-44页 |
| 2.4.1 长链生物素化ADM和合成 | 第39页 |
| 2.4.2 ADM和长链生物素化ADM与链霉亲和素的结合分析 | 第39页 |
| 2.4.3 Bio-ADM的生物学活性鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4.4 蛋白芯片上与生物素相互结合的蛋白 | 第40-41页 |
| 2.4.5 蛋白芯片上与ADM结合的阳性候选蛋白 | 第41-43页 |
| 2.4.6 阳性结合蛋白与ADM可能的相互作用关系 | 第43-44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-46页 |
| 2.6 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 阿霉素作用靶点CMPK1的筛选 | 第47-60页 |
| 3.1 前言 | 第47-48页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第48页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 主要仪器及耗材 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.3.1 ADM与生物素化ADM与芯片上蛋白点的竞争反应 | 第48-49页 |
| 3.3.2 阳性质粒DNA转化扩增 | 第49页 |
| 3.3.3 蛋白瞬时高表达细胞裂解液的准备 | 第49-50页 |
| 3.3.4 阳性蛋白表达的Western Blot鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.5 BLI法分子间相互作用检测 | 第51页 |
| 3.3.6 微量热泳动实验（Microscale thermophoresis, MST） | 第51-52页 |
| 3.3.7 计算机模拟ADM与CMPK1之间的相互作用 | 第52页 |
| 3.3.8 统计学分析 | 第52-53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-57页 |
| 3.4.1 蛋白芯片上ADM和Bio-ADM竞争性结合的蛋白 | 第53页 |
| 3.4.2 阳性结合蛋白在HEK293细胞中的表达 | 第53-54页 |
| 3.4.3 BLI分析ADM与阳性结合蛋白之间的相互作用 | 第54-55页 |
| 3.4.4 MST分析CMPK1与ADM的亲和力 | 第55-56页 |
| 3.4.5 CMPK1与ADM对接结果 | 第56-57页 |
| 3.5 讨论 | 第57-58页 |
| 3.6 小结 | 第58-60页 |
| 第四章 CMPK1与ADM的作用关系研究 | 第60-71页 |
| 4.1 前言 | 第60-61页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第61页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第61页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第61页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 HPLC法检测CMPK1的活性 | 第61-62页 |
| 4.3.2 胰腺癌细胞BxPC3和PANC1的培养 | 第62页 |
| 4.3.3 细胞对阿霉素及吉西他滨的药敏性检测 | 第62页 |
| 4.3.4 细胞增殖实验—结晶紫（crystal violet）染色 | 第62页 |
| 4.3.5 细胞迁移（cell migration）实验 | 第62-63页 |
| 4.3.6 CMPK1质粒及CMPK1 siRNA转染 | 第63页 |
| 4.3.7 Western blot检测 | 第63页 |
| 4.3.8 统计学分析 | 第63页 |
| 4.4 实验结果 | 第63-69页 |
| 4.4.1 阿霉素可以体外上调CMPK1的活性 | 第63-65页 |
| 4.4.2 阿霉素对CMPK1活性的上调不受其他因子的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.3 高表达CMPK1蛋白的胰腺癌细胞对吉西他滨的药敏性增强 | 第66-67页 |
| 4.4.4 低表达CMPK1蛋白的胰腺癌细胞对吉西他滨的药敏性降低 | 第67页 |
| 4.4.5 阿霉素和吉西他滨联用可以增强对胰腺癌细胞的药敏性 | 第67-68页 |
| 4.4.6 阿霉素和吉西他滨联用可以降低细胞迁移速度 | 第68-69页 |
| 4.5 讨论 | 第69-70页 |
| 4.6 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 CMPK1与乳腺癌细胞阿霉素耐药的相关性研究 | 第71-82页 |
| 5.1 前言 | 第71页 |
| 5.2 实验材料及仪器 | 第71-72页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第72页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第72页 |
| 5.3 实验方法 | 第72-75页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第72页 |
| 5.3.2 质粒及siRNA转染 | 第72-73页 |
| 5.3.3 药敏性检测 | 第73页 |
| 5.3.4 RT-PCR检测基因表达 | 第73-75页 |
| 5.3.5 Western Blot检测蛋白表达 | 第75页 |
| 5.3.6 CMPK1基因序列比对 | 第75页 |
| 5.3.7 统计学处理 | 第75页 |
| 5.4 结果 | 第75-80页 |
| 5.4.0 细胞内的p-gp表达无差异 | 第75-76页 |
| 5.4.1 CMPK1高表达的HEK293细胞药敏性降低 | 第76-77页 |
| 5.4.2 ADM耐药细胞中CMPK1的基因表达水平降低 | 第77-78页 |
| 5.4.3 ADM耐药细胞中CMPK1的蛋白表达水平降低 | 第78-79页 |
| 5.4.4 细胞经CMPK1 siRNA作用后药敏性降低 | 第79-80页 |
| 5.4.5 阿霉素耐药细胞中的CMPK1基因未发生突变 | 第80页 |
| 5.5 讨论 | 第80-81页 |
| 5.6 小结 | 第81-82页 |
| 主要结论与展望 | 第82-85页 |
| 主要结论 | 第82-83页 |
| 展望 | 第83-85页 |
| 论文创新点 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 附录 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第97页 |
