| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| ·细胞凋亡概述 | 第13-17页 |
| ·细胞凋亡的概念和意义 | 第13页 |
| ·细胞凋亡的过程和特征 | 第13-14页 |
| ·细胞凋亡的检测方法 | 第14-16页 |
| ·细胞凋亡的诱导 | 第16-17页 |
| ·ICAD 与细胞凋亡的关系的研究进展 | 第17-20页 |
| ·ICAD 的发现 | 第17页 |
| ·ICAD 的结构和特性 | 第17-19页 |
| ·ICAD 在细胞凋亡中的作用 | 第19-20页 |
| ·家蚕细胞凋亡的研究进展 | 第20-21页 |
| ·主要内容和技术路线 | 第21-23页 |
| ·实验目的和意义 | 第21页 |
| ·研究的主要内容 | 第21-22页 |
| ·研究技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 生物信息学分析 | 第23-29页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| ·BmICAD 基因的生物信息学分析 | 第23-27页 |
| ·BmICAD 的基因序列 | 第23-24页 |
| ·BmICAD 的保守结构域分析 | 第24-25页 |
| ·BmICAD 蛋白性质的预测 | 第25-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 BmICAD 基因的克隆表达、纯化和多克隆抗体制备 | 第29-47页 |
| ·试剂与材料 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·试剂配制 | 第29-32页 |
| ·方法 | 第32-40页 |
| ·家蚕组织总RNA 的提取和cDNA 的合成 | 第32-33页 |
| ·引物设计和目的基因的获得 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a(+)的双酶切 | 第34-35页 |
| ·连接反应 | 第35页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备(CaC1_2 法) | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第36页 |
| ·序列的测定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的镍柱亲和层析纯化 | 第38页 |
| ·Bradford 检测方法 | 第38页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第38-39页 |
| ·ELISA 测定抗体效价 | 第39页 |
| ·Western blotting 检测 | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-45页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmICAD 的鉴定 | 第41页 |
| ·序列测定 | 第41页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-BmICAD 的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第42-43页 |
| ·抗体效价的测定 | 第43-44页 |
| ·Western blotting 检测 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 BmICAD 在家蚕培养细胞中的亚细胞定位 | 第47-51页 |
| ·材料与试剂 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·试剂的配制 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 BmICAD 基因的RNAi 对家蚕培养细胞生物活性的影响 | 第51-59页 |
| ·材料与试剂 | 第51-52页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-55页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第52-53页 |
| ·RNAi----dsRNA 的转染 | 第53-54页 |
| ·MTT 检测 | 第54页 |
| ·ELISA 法检测细胞凋亡 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第55-56页 |
| ·BmICAD RNAi 的MTT 检测结果分析 | 第56-57页 |
| ·ELISA 检测BmICAD RNAi 对BmN 细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 BmICAD 蛋白的相互作用蛋白 | 第59-70页 |
| ·材料与试剂 | 第59-61页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·试剂的配制 | 第59-61页 |
| ·方法 | 第61-65页 |
| ·重组蛋白BmICAD 的制备 | 第61-62页 |
| ·BmN 细胞总蛋白的制备 | 第62页 |
| ·His-Pull down | 第62-63页 |
| ·双向电泳分析 | 第63-64页 |
| ·质谱分析 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-69页 |
| ·BmICAD 互作蛋白的 SDS-PAGE 结果分析 | 第65页 |
| ·BmICAD 互作蛋白的双向电泳结果分析 | 第65-67页 |
| ·BmICAD 互作蛋白的质谱分析结果 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 在学期间发表的论文 | 第78页 |
