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DON诱导禽类神经毒性的作用机理研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-8页
中英文缩写词第14-15页
文献综述第15-24页
引言第24-25页
1 材料与方法第25-35页
    1.1 试验动物第25页
    1.2 试剂材料第25页
    1.3 仪器第25-26页
    1.4 试验溶液的配制第26-27页
    1.5 禾谷镰刀菌的产毒培养第27页
        1.5.1 禾谷镰刀菌的复苏第27页
        1.5.2 禾谷镰刀菌孢子液的制备第27页
        1.5.3 DON的产生第27页
    1.6 HPLC方法的建立第27-28页
        1.6.1 DON标品试剂的配置第27页
        1.6.2 DON的高效液相色谱法检测的色谱条件第27-28页
        1.6.3 标准曲线的建立第28页
        1.6.4 检测限与定量限的测定第28页
    1.7 霉变玉米中DON的测定第28页
        1.7.1 样品的预处理第28页
        1.7.2 样品的免疫亲和柱净化第28页
        1.7.3 样品的HPLC分析第28页
    1.8 DON的提取、纯化第28-29页
        1.8.1 TLC定性检测DON方法的建立第28页
        1.8.2 DON的提取第28-29页
        1.8.3 DON的粗分第29页
        1.8.4 DON的纯化第29页
        1.8.5 结晶第29页
        1.8.6 晶体的鉴定及纯度的测定第29页
    1.9 雏鸡DON体内试验第29-30页
        1.9.1 试验动物的选择与分组第29页
        1.9.2 饲养管理第29页
        1.9.3 样品采集与处理第29-30页
    1.10 血清中DON蓄积量的检测第30页
        1.10.1 样品的预处理第30页
        1.10.2 样品的HPLC分析第30页
    1.11 脑组织中DON蓄积量的检测第30页
        1.11.1 样品的预处理第30页
        1.11.2 样品的HPLC分析第30页
    1.12 DON对脑组织形态的影响第30-31页
        1.12.1 石蜡切片的制备第30-31页
        1.12.2 HE染色第31页
    1.13 DON对脑组织超微结构的影响第31页
        1.13.1 脑组织超薄切片的制备第31页
        1.13.2 铅铀双重染色第31页
    1.14 神经细胞内[Ca~(2+)]i的检测第31-32页
        1.14.1 样品的处理及要求第31页
        1.14.2 检测方法第31-32页
    1.15 脑组织中CAM含量的检测第32页
        1.15.1 样品处理及要求第32页
        1.15.2 检测方法第32页
    1.16 鸡脑组织中CAM mRNA表达量的检测第32-33页
        1.16.1 引物设计第32页
        1.16.2 总RNA的提取第32页
        1.16.3 逆转录扩增钙调蛋白mRNA基因第32-33页
        1.16.4 扩增曲线的建立第33页
        1.16.5 熔解曲线分析第33页
        1.16.6 实时荧光定量PCR检测第33页
    1.17 脑组织中神经递质的检测第33-34页
        1.17.1 神经递质标准储备液的配置第33页
        1.17.2 神经递质标准工作液的高效液相色谱-荧光检测的色谱条件和荧光检测参数第33页
        1.17.3 标准曲线的建立第33-34页
        1.17.4 样品的处理第34页
        1.17.5 样品的高效液相色谱-荧光检测分析第34页
        1.17.6 样品验证性试验第34页
        1.17.7 检测限与定量限的测定第34页
    1.18 数据处理第34-35页
2 结果与分析第35-53页
    2.1 禾谷镰刀菌的产毒培养结果第35-36页
    2.2 DON-HPLC标准曲线的建立与检出限和定量限第36页
    2.3 霉变玉米中DON的测定第36页
    2.4 DON的提取纯化第36-38页
        2.4.1 TLC方法定性检测DON的结果第36-37页
        2.4.2 DON纯化后的结晶及鉴定结果第37-38页
    2.5 雏鸡生长状态及脑部剖检变化第38-39页
    2.6 血清中DON蓄积量的检测第39-40页
    2.7 脑组织中DON蓄积量的检测第40-42页
    2.8 DON对脑组织形态的影响第42-43页
    2.9 DON对脑组织超微结构的影响第43-45页
    2.10 神经细胞中[Ca~(2+)]i和脑组织中CAM的检测第45页
    2.11 鸡脑组织中CAM mRNA表达量检测结果第45-48页
        2.11.1 总RNA鉴定和PCR产物凝胶电泳第45-46页
        2.11.2 扩增曲线分析第46-47页
        2.11.3 溶解曲线分析第47-48页
        2.11.4 鸡脑组织中钙调蛋白mRNA相对表达量结果第48页
    2.12 神经递质标准曲线的建立与检出限和定量限第48-50页
    2.13 脑组织中神经递质的检测第50-53页
3 讨论第53-57页
    3.1 禾谷镰刀菌的产毒培养第53页
    3.2 DON HPLC的建立第53-54页
    3.3 DON的提取纯化第54页
    3.4 雏鸡生长状态及脑部剖检变化第54-55页
    3.5 血清及脑组织中DON蓄积量第55页
    3.6 DON对脑组织结构的影响第55页
    3.7 DON对钙稳态的影响第55-56页
    3.8 DON对脑组织中神经递质的影响第56-57页
4 结论第57-58页
参考文献第58-67页
致谢第67-68页
作者简介第68页

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