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鸟苷工程菌的构建及其发酵条件的初步研究

1 前言第9-25页
    1.1 鸟苷的理化性质第9页
    1.2 鸟苷的用途第9-10页
        1.2.1 在食品行业中的应用第9-10页
        1.2.2 在医药工业中的应用第10页
    1.3 鸟苷的测定方法第10-11页
        1.3.1 离子交换法分离测定鸟苷第10-11页
        1.3.2 酶法分析测定鸟苷第11页
        1.3.3 纸层析法分离测定鸟苷第11页
        1.3.4 纸电泳法测定鸟苷第11页
        1.3.5 薄层层析分离测定鸟苷第11页
    1.4 鸟苷的生产方法第11-12页
    1.5 鸟苷的提取第12-14页
        1.5.1 发酵液中鸟苷提取的工艺流程第12页
        1.5.2 发酵液的前处理第12-13页
        1.5.3 离子交换法提取鸟苷第13-14页
        1.5.4 鸟苷的精制第14页
    1.6 国内外研究状况、水平及发展趋势第14-16页
    1.7 生物合成途径第16-18页
    1.8 鸟苷合成的代谢调节机制第18-19页
    1.9 代谢工程与鸟苷工程菌的构建第19-22页
    1.10 鸟苷工程菌发酵过程控制第22-23页
        1.10.1 碳源和氮源对产苷的影响第22-23页
        1.10.2 无机盐及生长因子对产苷的影响第23页
        1.10.3 温度、pH 对产苷的影响第23页
    1.11 菌种保藏第23页
    1.12 论文立题背景及主要研究内容第23-25页
2. 材料与方法第25-36页
    2.1 实验材料第25-30页
        2.1.1 主要仪器第25页
        2.1.2 主要试剂第25-27页
        2.1.3 相关溶液第27-28页
        2.1.4 菌株和质粒第28-29页
        2.1.5 培养基第29-30页
    2.2 实验方法第30-36页
        2.2.1 发酵液中鸟苷的测定方法第30-32页
            2.2.1.1 发酵液预处理第31页
            2.2.1.2 发酵液中鸟苷的定性测定第31页
            2.2.1.3 离子交换法第31-32页
            2.2.1.4 纸层析法第32页
        2.2.2 pH的测定第32页
        2.2.3 吸光度的测定第32页
        2.2.4 菌体生长测定第32-33页
        2.2.5 发酵液中残糖测定第33页
        2.2.6 菌体生长曲线的测定第33页
        2.2.7 pUBLW2 质粒的提取第33页
        2.2.8 原生质体制备、再生及转化第33-34页
        2.2.9 转化子阳性菌落的检出第34页
        2.2.10 鸟苷生产菌摇瓶发酵方法第34页
        2.2.11 鸟苷生产菌5L罐发酵方法第34页
        2.2.12 分批发酵动力学模型研究方法第34-35页
        2.2.13 菌体生长量测定第35页
        2.2.14 平板菌落计数法第35-36页
3. 结果与讨论第36-68页
    3.1 鸟苷的测定方法第36-45页
        3.1.1 树脂的筛选第36-38页
            3.1.1.1 静态吸附第36-37页
            3.1.1.2 静态解吸第37-38页
        3.1.2 分离条件的确定第38-43页
            3.1.2.1 树脂装柱量的确定第41页
            3.1.2.2 洗脱液流速的确定第41-42页
            3.1.2.3 洗脱液与洗脱体积的确定第42-43页
        3.1.3 标准曲线的确定第43-44页
        3.1.4 回收率验证第44页
        3.1.5 离子交换法与纸层析测定方法的比较第44-45页
        3.1.6 小结第45页
    3.2 鸟苷工程菌的构建第45-52页
        3.2.1 受体菌遗传标记及产苷能力的测定第47页
        3.2.2 生长曲线的测定第47-48页
        3.2.3 酶浓度与TA208原生质体的形成率及再生率的关系第48-49页
        3.2.4 溶菌酶作用时间与原生质体的形成率及再生率的关系第49页
        3.2.5 目的转化子的筛选第49-50页
        3.2.6 受体菌TA208和转化子的SG 抗性比较第50-51页
        3.2.7 受体菌TA208、供体菌Q2901 和转化子TA424 的质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳第51页
        3.2.8 小结第51-52页
    3.3 鸟苷工程菌株TA424(pUBLW2)发酵条件的初步研究第52-59页
        3.3.1 种子培养基的均匀设计法优化第52-54页
            3.3.1.1 试验数据的回归分析及方程的建立第53-54页
            3.3.1.2 优化结果第54页
        3.3.2 发酵培养基的优化第54-59页
            3.3.2.1 模式识别优化方法第54-55页
            3.3.2.2 变量选择与数据预处理第55页
            3.3.2.3 评判标准第55页
            3.3.2.4 运算过程第55-59页
        3.3.3 小结第59页
    3.4 鸟苷工程菌分批发酵动力学模型研究第59-68页
        3.4.1 菌体生长动力学模型第61-62页
        3.4.2 产物生成动力学模型第62-64页
        3.4.3 基质消耗动力学模型第64-66页
        3.4.4 模型准确性的验证第66-67页
        3.4.5 小结第67-68页
4. 结论第68-69页
5. 展望第69-70页
6. 参考文献第70-74页
7. 研究生期间发表论文情况第74-75页
8. 致谢第75页

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