| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 第一章 前言 | 第11-16页 |
| 1.1 极端环境微生物与碱性蛋白酶 | 第11-12页 |
| 1.2 嗜碱氧化微杆菌HSL10与碱性蛋白酶 | 第12-13页 |
| 1.3 链霉菌Streptomyces sp.AM-7161及其代谢产物 | 第13-14页 |
| 1.3.1 AM7161次级代谢产物及调控系统 | 第13页 |
| 1.3.2 Medermycin的聚酮合成基因簇(PKS) | 第13页 |
| 1.3.3 Medermycin的后期修饰 | 第13-14页 |
| 1.4 美达霉素的合成的调控 | 第14-15页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-20页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.1 菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 质粒 | 第16-17页 |
| 2.2 试剂 | 第17-18页 |
| 2.2.1 培养基 | 第17页 |
| 2.2.2 抗生素及其他溶液 | 第17-18页 |
| 2.3 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.3.1 蛋白酶活测定 | 第18页 |
| 2.3.2 紫外诱变 | 第18页 |
| 2.3.3 发酵产物的萃取及HPLC分析 | 第18-19页 |
| 2.3.4 发酵产物的抑菌活性分析 | 第19页 |
| 2.3.5 接合转移 | 第19页 |
| 2.3.6 常规DNA克隆和链霉菌的遗传操作 | 第19-20页 |
| 第三章 氧化微杆菌HSL10的碱性蛋白酶研究 | 第20-34页 |
| 3.1 HSL10碱性蛋白酶活性的平板分析 | 第20-23页 |
| 3.2 HSL10野生型菌株蛋白酶活性分析 | 第23-28页 |
| 3.2.1 培养基优化和透析袋孔径的选择 | 第23页 |
| 3.2.2 培养基中金属离子对HSL10蛋白酶酶活的影响 | 第23-24页 |
| 3.2.3 HSL10蛋白酶的最适反应温度 | 第24-25页 |
| 3.2.4 HSL10蛋白酶的最适反应pH | 第25-26页 |
| 3.2.5 HSL10蛋白酶耐热性分析 | 第26页 |
| 3.2.6 金属离子对HSL10蛋白酶活性的影响 | 第26-27页 |
| 3.2.7 其他因子对HSL10蛋白酶活性的影响 | 第27-28页 |
| 3.3 HSL10全基因组测序及分泌型蛋白酶基因的初步分析 | 第28-31页 |
| 3.4 HSL10蛋白酶AP1-HSL10基因的克隆表达 | 第31-33页 |
| 3.4.1 PCR扩增氧化微杆菌HSL10蛋白酶基因ap1-HSL10 | 第31页 |
| 3.4.2 HSL10蛋白酶apl-HSL10基因酶切验证和表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.4.3 HSL10蛋白酶基因异源表达平板分析 | 第32-33页 |
| 3.5 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 Streptomyces sp.AM-7161紫外诱变分析 | 第34-40页 |
| 4.1 AM-7161紫外诱变及产素、抑菌活性分析 | 第35-40页 |
| 4.1.1 AM-7161紫外诱变 | 第35页 |
| 4.1.2 AM-7161野生型及突变型菌株产素及抑菌活性分析 | 第35-37页 |
| 4.1.3 AM-7161野生型及突变型菌株发酵液萃取物HPLC分析 | 第37-38页 |
| 4.1.4 AM-7161产美达霉素代谢途径的推导 | 第38-39页 |
| 4.1.5 讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 Streptomyces sp.AM-7161调控基因MED-ORF10的敲除和回补 | 第40-48页 |
| 5.1 MED-ORF10的敲除“自杀质粒”的构建 | 第40-41页 |
| 5.2 “自杀质粒”通过接合转移导入AM-7161 | 第41-42页 |
| 5.3 MED-ORF10敲除突变菌分子水平验证 | 第42-43页 |
| 5.4 AM-7161调控基因MED-ORF10敲除菌产素及HPLC分析 | 第43-44页 |
| 5.5 回补质粒的构建 | 第44-45页 |
| 5.6 回补质粒与LJ结合转移及验证 | 第45-47页 |
| 5.7 讨论 | 第47-48页 |
| 总结与展望 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 硕士期间发表论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
