| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 文章中的缩略词 | 第9-13页 |
| 1 引言部分 | 第13-22页 |
| 1.1 杆状病毒 | 第13-16页 |
| 1.1.1 杆状病毒的简介 | 第13页 |
| 1.1.2 杆状病毒的分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 杆状病毒的病毒粒子 | 第14-15页 |
| 1.1.4 杆状病毒的生活周期----以核型多角体病毒为例 | 第15-16页 |
| 1.2 杆状病毒基因表达的调控 | 第16-17页 |
| 1.2.1 杆状病毒基因表达的时序性 | 第16页 |
| 1.2.2 杆状病毒转录的调节 | 第16-17页 |
| 1.2.3 杆状病毒晚期表达因子 | 第17页 |
| 1.3 杆状病毒AcMNPV 39k的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 蛋白质相互作用 | 第18-21页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术 | 第19页 |
| 1.4.2 双分子荧光互补技术 | 第19-20页 |
| 1.4.3 免疫共沉淀技术 | 第20页 |
| 1.4.4 荧光共振能量转移技术 | 第20页 |
| 1.4.5 蛋白质芯片技术 | 第20-21页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料和工具 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-30页 |
| 2.1.1 病毒及昆虫细胞系 | 第22页 |
| 2.1.2 大肠杆菌及酵母菌菌株 | 第22页 |
| 2.1.3 抗生素及培养基 | 第22-25页 |
| 2.1.4 常用酶及分子量Marker | 第25页 |
| 2.1.5 试剂及试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.6 常用溶液配方 | 第25-27页 |
| 2.1.7 载体和引物 | 第27-29页 |
| 2.1.8 实验中构建的重组质粒 | 第29-30页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第30-32页 |
| 3 实验方法及步骤 | 第32-47页 |
| 3.1 重组载体构建 | 第32-36页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第32页 |
| 3.1.2 PCR扩增目的片段 | 第32-33页 |
| 3.1.3 回收DNA凝胶片段 | 第33页 |
| 3.1.4 酶切PCR片段或质粒酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.1.5 载体与目的片段的连接反应 | 第33-34页 |
| 3.1.6 Ca~(2+)化学转化感受态的制备 | 第34页 |
| 3.1.7 连接产物或质粒的转化 | 第34-35页 |
| 3.1.8 碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒DNA | 第35页 |
| 3.1.9 超纯质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.2 酵母双杂交实验 | 第36-41页 |
| 3.2.1 LiAc法制备Y187和AH109酵母菌株感受态细胞及诱饵载体的转化 | 第36-37页 |
| 3.2.2 诱饵蛋白的自激活检测 | 第37页 |
| 3.2.3 诱饵蛋白的毒性检测 | 第37页 |
| 3.2.4 与Sf9 cDNA文库的融合杂交实验 | 第37-39页 |
| 3.2.5 划线筛选阳性克隆 | 第39页 |
| 3.2.6 酵母菌落PCR | 第39-40页 |
| 3.2.7 X-Gal显色 | 第40页 |
| 3.2.8 酵母质粒的提取及PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.2.9 将酵母质粒转化至大肠杆菌感受态细胞中 | 第40页 |
| 3.2.10 回交验证相互作用 | 第40页 |
| 3.2.11 测序及生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 3.3 蛋白质原核表达与纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.1 39K-His蛋白的原核表达 | 第41页 |
| 3.3.2 His标签融合蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 3.4 多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 3.5 非特异性抗体的中和 | 第42-43页 |
| 3.6 蛋白免疫印迹 | 第43页 |
| 3.7 重组Bacmid的构建 | 第43-45页 |
| 3.7.1 供体质粒的构建 | 第43页 |
| 3.7.2 重组Bacmid的获得 | 第43-44页 |
| 3.7.3 PCR验证重组Bacmid | 第44-45页 |
| 3.8 细胞转染 | 第45页 |
| 3.9 细胞感染 | 第45页 |
| 3.10 双分子荧光共定位实验 | 第45-46页 |
| 3.11 双分子荧光互补实验 | 第46页 |
| 3.12 免疫共沉淀实验 | 第46-47页 |
| 4 实验结果 | 第47-63页 |
| 4.1 与AcMNPV 39K相互作用的Sf9细胞蛋白基因的筛选 | 第47-52页 |
| 4.1.1 诱饵载体pGBKT7-39k的构建 | 第47页 |
| 4.1.2 GAL4 BD-39K融合蛋白的自激活和细胞毒性检测 | 第47-48页 |
| 4.1.3 与39K相互作用的Sf9细胞蛋白的cDNA克隆的筛选和鉴定 | 第48-52页 |
| 4.2 AcMNPV 39K与X在Sf9中的亚细胞共定位分析 | 第52-55页 |
| 4.2.1 共定位实验重组Bacmid的构建 | 第52-54页 |
| 4.2.2 AcMNPV 39K与X在Sf9中的亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 4.3 AcMNPV 39K与X之间的双分子荧光互补分析 | 第55-57页 |
| 4.3.1 双分子荧光互补实验重组Bacmid的构建 | 第55-56页 |
| 4.3.2 双分子荧光互补分析结果 | 第56-57页 |
| 4.4 AcMPV 39K的原核表达和多克隆抗体制备 | 第57-60页 |
| 4.4.1 AcMNPV 39K的原核表达与纯化 | 第57-59页 |
| 4.4.2 AcMNPV 39K抗体的制备及非特异性His标签抗体的中和 | 第59-60页 |
| 4.5 AcMNPV 39K与X之间免疫共沉淀分析 | 第60-63页 |
| 4.5.1 免疫共沉淀实验重组Bacmid的构建 | 第60-62页 |
| 4.5.2 免疫共沉淀的分析结果 | 第62-63页 |
| 5 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 在校期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
