| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词及英汉对照 | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 白细胞介素10的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 IL-10的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 IL-10的生物学功能 | 第11页 |
| 1.1.3 IL-10与肠道炎症 | 第11-12页 |
| 1.1.4 人IL-10家族 | 第12-13页 |
| 1.2 白细胞介素22的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 IL-22的概述 | 第13页 |
| 1.2.2 IL-22的编码基因和分子结构 | 第13页 |
| 1.2.3 人IL-22的细胞来源 | 第13-14页 |
| 1.2.4 人IL-22的受体与结合蛋白 | 第14页 |
| 1.2.5 人IL-22介导的信号传导 | 第14-15页 |
| 1.2.6 人IL-22在肠胃道中的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.3 IPEC-J2细胞与肠道炎症 | 第16页 |
| 1.4 基因表达系统的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的意义 | 第17-18页 |
| 2 实验材料和方法 | 第18-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 引物 | 第18-19页 |
| 2.1.3 质粒 | 第19页 |
| 2.1.4 菌株 | 第19页 |
| 2.1.5 细胞 | 第19页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.7 试剂来源 | 第20-21页 |
| 2.2 主要试剂配方 | 第21-23页 |
| 2.2.1 主要培养基 | 第21页 |
| 2.2.2 抗生素试剂 | 第21页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.4 质粒抽提试剂 | 第22页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞制备试剂 | 第22页 |
| 2.2.6 动物细胞培养试剂 | 第22页 |
| 2.2.7 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.8 蛋白质镍柱纯化试剂 | 第23页 |
| 2.2.9 蛋白质定量试剂 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-40页 |
| 2.3.1 长白猪不同组织的采集 | 第23-24页 |
| 2.3.2 组织总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.3.3 RNA质量的检测 | 第24-25页 |
| 2.3.4 cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.3.5 pIL-22全长基因的克隆 | 第25-28页 |
| 2.3.6 pIL-22的组织分布 | 第28-29页 |
| 2.3.7 pIL-22生物信息分析 | 第29-30页 |
| 2.3.8 原核表达载体pET28a-IL-22的构建 | 第30-33页 |
| 2.3.9 大肠杆菌Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS的转化 | 第33页 |
| 2.3.10 IPTG诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.3.11 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 2.3.12 镍柱亲和层析纯化目的蛋白及蛋白定量 | 第35-36页 |
| 2.3.13 真核表达载体pcDNA3.1-IL-22的构建 | 第36-38页 |
| 2.3.14 无内毒素质粒的提取 | 第38页 |
| 2.3.15 IPEC-J2细胞的转染 | 第38-39页 |
| 2.3.16 ETEC196细菌感染IPEC-J2细胞 | 第39页 |
| 2.3.17 细胞总RNA的提取及cDNA的合成 | 第39页 |
| 2.3.18 实时荧光定量PCR检测基因的表达 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-60页 |
| 3.1 组织总RNA的提取及质量检测 | 第40-41页 |
| 3.2 pIL-22全长基因的克隆 | 第41-42页 |
| 3.3 pIL-22的组织分布 | 第42-43页 |
| 3.4 pIL-22生物信息分析 | 第43-51页 |
| 3.4.1 序列相似性比对 | 第43-47页 |
| 3.4.2 进化树分析 | 第47-48页 |
| 3.4.3 信号肽分析 | 第48页 |
| 3.4.4 蛋白质理化性质分析 | 第48页 |
| 3.4.5 跨膜区域和亚细胞定位分析 | 第48-49页 |
| 3.4.6 结构功能域分析 | 第49页 |
| 3.4.7 蛋白质二级结构分析 | 第49-50页 |
| 3.4.8 蛋白质三级结构分析 | 第50-51页 |
| 3.5 原核表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.5.1 pIL-22成熟肽编码基因的克隆 | 第51-52页 |
| 3.5.2 原核表达载体pET28a-IL-22的构建 | 第52页 |
| 3.5.3 大肠杆菌Rosetta-gami 2 (DE3) pLysS的转化 | 第52-53页 |
| 3.6 pIL-22的表达及纯化 | 第53-55页 |
| 3.6.1 最佳表达条件的确定 | 第53-54页 |
| 3.6.2 Ni柱亲合层析纯化重组蛋白 | 第54-55页 |
| 3.7 真核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.7.1 pIL-22全长肽编码基因的克隆 | 第55-56页 |
| 3.7.2 真核表达载体pcDNA3.1-IL-22的构建 | 第56页 |
| 3.8 真核表达质粒转染IPEC-J2后pIL-22的表达 | 第56-58页 |
| 3.9 pIL-22抗感染活性分析 | 第58-60页 |
| 4 讨论与结论 | 第60-63页 |
| 4.1 讨论 | 第60-61页 |
| 4.2 结论 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
