| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-13页 |
| 第一部分 前言 | 第13-17页 |
| 1.1. 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2. 研究目标 | 第14页 |
| 1.3. 应用前景 | 第14-15页 |
| 参考文献 | 第15-17页 |
| 第二部分 结直肠癌组织标本中miR-139-5p表达水平及临床预后分析 | 第17-38页 |
| 2.1. 引言 | 第17页 |
| 2.2. 材料与方法 | 第17-21页 |
| 2.2.1. 入组病例与标准 | 第17-18页 |
| 2.2.2. 标本取材与保存 | 第18页 |
| 2.2.3. 临床资料统计与随访 | 第18页 |
| 2.2.4. 抽提组织标本中富集miRNA的总RNA | 第18-19页 |
| 2.2.5. 抽提细胞中富集miRNA的总RNA | 第19-20页 |
| 2.2.6. 针对hsa-miR-139-5p的miRNA反转录 | 第20页 |
| 2.2.7. 针对hsa-miR-139-5p的实时定量聚合酶链反应 | 第20-21页 |
| 2.2.8. 统计方法 | 第21页 |
| 2.3. 结果 | 第21-32页 |
| 2.3.1. 118例病例随访结果及临床病理学资料 | 第21-23页 |
| 2.3.2. 大肠癌组织和癌旁正常组织之间miR-139-5p表达差异 | 第23-25页 |
| 2.3.3. 癌组织miR-139-5p表达水平和临床病理资料之间的关系 | 第25-26页 |
| 2.3.4. 癌组织miR-139-5p表达水平对于大肠癌预后的单因素分析 | 第26-28页 |
| 2.3.5. 癌组织miR-139-5p表达水平对于大肠癌预后的多因素分析 | 第28-30页 |
| 2.3.6. 根据是否接受辅助化疗进行亚组分析癌组织miR-139-5p表达水平对于大肠癌预后的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.7. 根据病理学分期进行亚组分析癌组织miR-139-5p表达水平对于大肠癌预后的影响 | 第31-32页 |
| 2.4. 讨论 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 第三部分 miR-139-5p在肠癌细胞株中表达水平以及miR-139-5p过表达对于肠细胞生物学行为的影响 | 第38-50页 |
| 3.1. 引言 | 第38页 |
| 3.2. 材料与方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1. 细胞株培养 | 第38-39页 |
| 3.2.2. 细胞传代方法 | 第39页 |
| 3.2.3. 细胞冻存方法 | 第39页 |
| 3.2.4. 细胞复苏方法 | 第39页 |
| 3.2.5. miR-139-5p mimic的细胞瞬时转染(脂质体法) | 第39-40页 |
| 3.2.6. 细胞增殖实验 | 第40页 |
| 3.2.7. 细胞周期实验 | 第40-41页 |
| 3.2.8. 细胞迁移实验 | 第41-42页 |
| 3.2.9. 细胞侵袭实验 | 第42页 |
| 3.2.10. 统计方法 | 第42页 |
| 3.3. 结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1. miR-139-5p在人类肠癌细胞株中的表达水平检测 | 第42-43页 |
| 3.3.2. miR-139-5p过表达对于肠癌细胞体外增殖能力的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3. miR-139-5p对人肠癌细胞周期的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.4. miR-139-5p对人肠癌细胞体外迁移/侵袭能力的影响 | 第45-48页 |
| 3.4. 讨论 | 第48页 |
| References | 第48-50页 |
| 第四部分 miR-139-5p通过ZEB1调控EMT过程抑制肠癌细胞迁移和侵袭 | 第50-74页 |
| 4.1. 引言 | 第50-51页 |
| 4.2. 材料与方法 | 第51-59页 |
| 4.2.1. 细胞株培养、传代、冻存、复苏方法 | 第51-52页 |
| 4.2.2. miR-139-5p mimic的细胞瞬时转染(脂质体法) | 第52页 |
| 4.2.3. miR-139-5p靶基因的生物信息学预测 | 第52页 |
| 4.2.4. ZEB1荧光素酶报告基因载体构建 | 第52-53页 |
| 4.2.5. ZEB1荧光素酶报告基因和miR-139-5p共转染 | 第53-54页 |
| 4.2.6. 荧光素酶报告基因检测 | 第54-55页 |
| 4.2.7. 蛋白质免疫印迹实验(Western Blot) | 第55-56页 |
| 4.2.8. 细胞免疫荧光(ICC) | 第56-57页 |
| 4.2.9. 肠癌组织标本的入组和收集 | 第57页 |
| 4.2.10. 肠癌组织和肠癌细胞总RNA抽提 | 第57页 |
| 4.2.11. 肠癌组织和肠癌细胞总RNA的反转录 | 第57-58页 |
| 4.2.12. 肠癌组织和肠癌细胞的实时定量PCR检测(QuantitativeReal-time PCR) | 第58-59页 |
| 4.2.13. 统计方法 | 第59页 |
| 4.3. 结果 | 第59-67页 |
| 4.3.1. miR-139-5p调控转移相关靶基因的生物信息学预测 | 第59-62页 |
| 4.3.2. miR-139-5p在体外水平能够调控ZEB1蛋白表达量 | 第62页 |
| 4.3.3. miR-139-5p通过作用于ZEB1的3'UTR下调其表达 | 第62-64页 |
| 4.3.4. ZEB1与miR-139-5p在人肠癌组织中的表达相关性分析 | 第64-65页 |
| 4.3.5. miR-139-5p通过调控ZEB1抑制肠癌细胞EMT | 第65-67页 |
| 4.4. 讨论 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 第五部分 miR-139-5p通过调控Bcl2介导肠癌化疗耐药 | 第74-90页 |
| 5.1. 前言 | 第74-75页 |
| 5.2. 材料方法 | 第75-78页 |
| 5.2.1. 细胞的培养与传代 | 第75页 |
| 5.2.2. 临床标本中miR-139-5p与BCL2蛋白的表达关联分析 | 第75页 |
| 5.2.3. miR-139-5p直接调控BCL2的生物信息学预测 | 第75页 |
| 5.2.4. miR-139-5p mimic的细胞瞬时转染(脂质体法) | 第75-76页 |
| 5.2.5. 细胞总RNA的反转录PCR | 第76页 |
| 5.2.6. 实时定量PCR法检测BCL2的mRNA水平 | 第76页 |
| 5.2.7. 免疫印迹法检测BCL2蛋白水平 | 第76页 |
| 5.2.8. Bcl2荧光素酶报告基因载体构建 | 第76页 |
| 5.2.9. Bcl2荧光素酶报告基因和miR-139-5p共转染 | 第76页 |
| 5.2.10. 荧光素酶报告基因检测 | 第76页 |
| 5.2.11. 细胞增殖实验 | 第76页 |
| 5.2.12. 细胞药敏实验与IC50测定 | 第76-77页 |
| 5.2.13. 细胞凋亡检测 | 第77-78页 |
| 5.2.14. 统计方法 | 第78页 |
| 5.3. 结果 | 第78-85页 |
| 5.3.1. 肿瘤细胞药敏试验和IC50测定 | 第78-80页 |
| 5.3.2. 118例肠癌组织中miR-139-5p和BCL2表达关联分析 | 第80-81页 |
| 5.3.3. 肠癌细胞中miR-139-5p对BCL2表达水平的影响 | 第81-82页 |
| 5.3.4. miR-139-5p调控BCL2机制的生物信息学预测 | 第82页 |
| 5.3.5. miR-139-5p通过作用于BCL2的3'UTR而下调其表达 | 第82-84页 |
| 5.3.6. miR-139-5p促进氟尿嘧啶和奥沙利铂诱导的细胞凋亡 | 第84-85页 |
| 5.4. 讨论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-90页 |
| 第六部分 EZH2通过组蛋白27酪氨酸三甲基化抑制miR-139-5p表达 | 第90-105页 |
| 6.1. 前言 | 第90-91页 |
| 6.2. 材料与方法 | 第91-96页 |
| 6.2.1. 细胞株培养、传代、冻存、复苏方法 | 第91页 |
| 6.2.2. 含shEZH2片段的质粒构建 | 第91-92页 |
| 6.2.3. 含shEZH2片段质粒的细胞瞬时转染(脂质体法) | 第92-93页 |
| 6.2.4. 蛋白质免疫印迹实验(Western Blot) | 第93页 |
| 6.2.5. 肠癌组织标本的入组和收集 | 第93页 |
| 6.2.6. 肠癌组织和肠癌细胞总RNA抽提 | 第93页 |
| 6.2.7. 肠癌组织和肠癌细胞总RNA的反转录 | 第93页 |
| 6.2.8. 肠癌组织和肠癌细胞的实时定量PCR检测(QuantitativeReal-time PCR) | 第93页 |
| 6.2.9. 染色质免疫共沉淀(Chromatin Inmmunoprecipitation,ChIP) | 第93-96页 |
| 6.2.10. 统计方法 | 第96页 |
| 6.3. 结果 | 第96-100页 |
| 6.3.1. EZH2在肠癌细胞株中的表达水平 | 第96-97页 |
| 6.3.2. RNA干扰肠癌细胞中EZH2使得miR-139-5p表达上调 | 第97-98页 |
| 6.3.3. 肠癌组织中EZH2和miR-139-5p表达量的相关性分析 | 第98-99页 |
| 6.3.4. miR-139-5p的转录受到组蛋白3酪氨酸27位三甲基化调控 | 第99-100页 |
| 6.4. 讨论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-105页 |
| 第七部分 结论 | 第105-107页 |
| 综述：A review of shifting concepts in surgical management of rectal cancer inthe era of neoadjuvant treatment | 第107-119页 |
| References | 第114-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第121-122页 |
