缩略语表 | 第5-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
前言 | 第14-16页 |
文献回顾 | 第16-30页 |
第一部分 一步法TaqMan探针qRT-PCR检测DENV2方法的建立及优化 | 第30-46页 |
1 材料 | 第30-33页 |
1.1 毒种和细胞株 | 第30页 |
1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
1.3 常用培养液(基)与缓冲液 | 第31-32页 |
1.4 主要仪器与器材 | 第32-33页 |
2 方法 | 第33-40页 |
2.1 细胞培养 | 第33页 |
2.2 病毒的增殖与毒力检测 | 第33-35页 |
2.3 引物设计与合成 | 第35-36页 |
2.4 标准品的制备 | 第36-38页 |
2.5 标准曲线 | 第38-40页 |
3 结果 | 第40-44页 |
3.1 浓缩DENV2毒力检测 | 第40-41页 |
3.2 DENV2 NS5基因片段的PCR扩增 | 第41-44页 |
4 讨论 | 第44-46页 |
第二部分 检测DENV2抗体中和效应的qRT-PCR-MN方法的建立 | 第46-59页 |
1 材料 | 第46-47页 |
1.1 毒种和细胞株 | 第46页 |
1.2 主要试剂与抗体 | 第46页 |
1.3 常用培养液(基)与缓冲液 | 第46-47页 |
1.4 主要仪器与器材 | 第47页 |
2 方法 | 第47-50页 |
2.1 引物、探针设计与合成 | 第47页 |
2.2 空斑减少中和试验 | 第47-48页 |
2.3 qRT-PCR-MN测定 | 第48-49页 |
2.4 提取DENV2感染细胞内总RNA | 第49-50页 |
2.5 不同的实时定量PCR仪比对 | 第50页 |
3 结果 | 第50-56页 |
3.1 最佳病毒感染剂量和感染后检测时间的确定 | 第50-51页 |
3.2 感染后细胞内外病毒量的相关性 | 第51页 |
3.3 qRT-PCR方法可以辨别病毒感染剂量两倍的变化 | 第51-52页 |
3.4 PRNT与qRT-PCR-MN相关性分析 | 第52-54页 |
3.5 qRT-PCR-MN方法的特异性、灵敏度和一致性分析结果 | 第54-55页 |
3.6 qRT-PCR-MN方法在不同实时定量PCR仪上一致性的分析 | 第55-56页 |
4 讨论 | 第56-59页 |
小结 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-73页 |
个人简历和研究成果 | 第73-74页 |
致谢 | 第74-75页 |