| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 磷脂酰肌醇 | 第12页 |
| 1.2 磷脂 | 第12-13页 |
| 1.3 磷脂酶的简介 | 第13-14页 |
| 1.4 磷脂酶C的简介 | 第14-15页 |
| 1.5 PI-PLC简介 | 第15-16页 |
| 1.6 PI-PLC活性的检测方法 | 第16-18页 |
| 1.6.1 卵黄平板法 | 第16-17页 |
| 1.6.2 p-NPPC底物法 | 第17页 |
| 1.6.3 酸碱滴定法 | 第17页 |
| 1.6.4 定磷法 | 第17页 |
| 1.6.5 放射性同位素标记法 | 第17-18页 |
| 1.7 微生物产PI-PLC国内外研究现状 | 第18-20页 |
| 1.7.1 国外PI-PLC研究现状 | 第18-19页 |
| 1.7.2 国内PI-PLC研究现状 | 第19-20页 |
| 1.8 本课题的研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第2章 PI-PLC基因在大肠杆菌中的克隆与表达 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 酶及相关试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 培养基及相关试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2.3 方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 PI-PLC基因的设计与合成 | 第24页 |
| 2.3.2 重组质粒pET28a(+)-PIPLC在大肠杆菌中的克隆 | 第24-26页 |
| 2.3.3 重组质粒pET28a(+)-PIPLC的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.4 阳性克隆的鉴定 | 第27页 |
| 2.3.5 pET32a(+)-PIPLC载体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第27-28页 |
| 2.3.6 重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.7 PI-PLC酶活性验证 | 第29页 |
| 2.3.8 利用酶联反应定量测定菌液中PI-PLC的含量 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.4.1 PI-PLC基因的优化与合成 | 第30-31页 |
| 2.4.2 目的基因片段获得与鉴定 | 第31页 |
| 2.4.3 重组质粒pET28a(+)-PIPLC的构建 | 第31-32页 |
| 2.4.4 重组质粒pET28a(+)-PIPLC在大肠杆菌中的克隆 | 第32-33页 |
| 2.4.5 SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白 | 第33-34页 |
| 2.4.6 PI-PLC酶活性验证 | 第34-35页 |
| 2.4.7 利用酶联反应定量测定菌液中PI-PLC的含量 | 第35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 第3章 PI-PLC基因在乳酸乳球菌中的克隆与表达 | 第36-48页 |
| 3.1 引言 | 第36-37页 |
| 3.2 材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第37页 |
| 3.2.2 酶及相关试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.3 培养基及培养条件 | 第38页 |
| 3.3 方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 DNA操作技术 | 第38页 |
| 3.3.2 目的基因获得 | 第38页 |
| 3.3.3 引物设计与合成 | 第38页 |
| 3.3.4 PI-PLC基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.3.5 克隆载体pEASY-T1-PIPLC的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.6 构建表达载体转入大肠杆菌 | 第40-41页 |
| 3.3.7 表达载体转化入乳酸乳球菌 | 第41页 |
| 3.3.8 表达载体在乳酸乳球菌中的表达 | 第41页 |
| 3.3.9 SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第41-42页 |
| 3.3.10 MALDI-TOF质谱鉴定目的蛋白 | 第42页 |
| 3.3.11 PI-PLC的酶活力测定 | 第42页 |
| 3.3.12 酶联反应分析测定酶含量 | 第42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-47页 |
| 3.4.1 目的片段和克隆载体的获得及鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4.2 重组大肠杆菌表达载体pAMJ399-PIPLC的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4.3 重组乳酸乳球菌表达载体的鉴定 | 第44页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE鉴定重组蛋白 | 第44-45页 |
| 3.4.5 MALDI-TOF质谱鉴定目的蛋白 | 第45页 |
| 3.4.6 PI-PLC酶活性验证 | 第45-46页 |
| 3.4.7 酶联反应分析测定酶含量 | 第46-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47-48页 |
| 第4章 PI-PLC抗鸡球虫效果的研究 | 第48-58页 |
| 4.1 引言 | 第48-49页 |
| 4.2 材料 | 第49页 |
| 4.2.1 球虫球种 | 第49页 |
| 4.2.2 试验动物 | 第49页 |
| 4.2.3 实验用药 | 第49页 |
| 4.2.4 对照用药 | 第49页 |
| 4.2.5 饲料 | 第49页 |
| 4.3 方法 | 第49-52页 |
| 4.3.1 试验分组及处理 | 第49-50页 |
| 4.3.2 球虫感染和给药方法 | 第50页 |
| 4.3.3 检测指标 | 第50-52页 |
| 4.4 结果 | 第52-55页 |
| 4.4.1 病理学观察 | 第52页 |
| 4.4.2 体重变化 | 第52-53页 |
| 4.4.3 盲肠病变计分 | 第53页 |
| 4.4.4 OPG计数 | 第53-54页 |
| 4.4.5 抗球虫指数 | 第54-55页 |
| 4.5 讨论 | 第55-58页 |
| 全文总结与展望 | 第58-60页 |
| 主要结论 | 第58页 |
| 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第68页 |
