| 致谢 | 第4-8页 |
| 缩写词 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 植物蔗糖转运蛋白的研究意义 | 第10-12页 |
| 1.2 植物SUTs的家族分类 | 第12-13页 |
| 1.3 植物SUT基因功能的研究方法 | 第13-15页 |
| 1.3.1 酵母体内的异源表达分析 | 第13-14页 |
| 1.3.2 基因过量或抑制表达 | 第14页 |
| 1.3.3 亚细胞定位 | 第14-15页 |
| 1.3.4 酵母双杂交技术 | 第15页 |
| 1.4 植物SUT基因的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.4.1 激素的调节 | 第15页 |
| 1.4.2 蛋白质互作 | 第15-16页 |
| 1.4.3 糖调控 | 第16页 |
| 1.4.4 环境调控 | 第16页 |
| 1.5 抗体技术在植物研究中的应用 | 第16-17页 |
| 1.6 桃SUT的研究意义 | 第17-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-32页 |
| 3.1 试验材料 | 第19-21页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第19-20页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第20页 |
| 3.1.3 工具酶及生化试剂 | 第20页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 3.1.5 供试仪器 | 第21页 |
| 3.2 试验方法 | 第21-32页 |
| 3.2.1 桃蔗糖转运蛋白家族基因的扩增 | 第21-22页 |
| 3.2.2 PpSUT基因的序列分析及亚细胞定位预测 | 第22页 |
| 3.2.3 酵母体内的异源表达 | 第22-27页 |
| 3.2.3.1 酵母表达载体的构建 | 第22-26页 |
| 3.2.3.1.1 含有酶切位点的目的基因的扩增 | 第22-23页 |
| 3.2.3.1.2 PCR产物的回收和纯化 | 第23页 |
| 3.2.3.1.3 回收片段与测序载体的连接 | 第23页 |
| 3.2.3.1.4 重组质粒的转化 | 第23-24页 |
| 3.2.3.1.5 重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| 3.2.3.1.6 目的基因与表达载体的酶切与回收 | 第25页 |
| 3.2.3.1.7 目的基因与表达载体片段的连接与转化 | 第25-26页 |
| 3.2.3.2 表达载体转化酵母突变体 | 第26页 |
| 3.2.3.2.1 酵母感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 3.2.3.2.2 重组质粒转化酵母突变体 | 第26页 |
| 3.2.3.3 酵母蔗糖缺陷功能互补检测 | 第26-27页 |
| 3.2.4 PpSUT2基因的原核表达 | 第27-29页 |
| 3.2.4.1 PpSUT2原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.2.4.2 融合蛋白的表达及纯化 | 第28-29页 |
| 3.2.4.2.1 PpSUT2融合蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| 3.2.4.2.2 pET32a-PpSUT2表达产物存在形式的检测 | 第28页 |
| 3.2.4.2.3 融合蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 3.2.5 桃PpSUT2多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| 3.2.5.1 融合蛋白免疫实验 | 第29页 |
| 3.2.5.2 抗血清效价检测 | 第29-30页 |
| 3.2.5.3 抗体的Western blot检测 | 第30页 |
| 3.2.6 PpSUT2的蛋白组织特异性表达 | 第30-32页 |
| 3.2.6.1 桃各组织器官的蛋白提取 | 第30-31页 |
| 3.2.6.2 桃PpSUT2蛋白表达的Western blot检测 | 第31-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-40页 |
| 4.1 桃SUT家族基因的克隆与序列分析 | 第32-33页 |
| 4.2 桃SUT基因的酵母蔗糖缺陷功能互补分析 | 第33-35页 |
| 4.3 PpSUT2基因的原核表达 | 第35-37页 |
| 4.3.1 原核表达载体p ET32a-PpSUT2的构建 | 第35页 |
| 4.3.2 融合蛋白的诱导表达 | 第35页 |
| 4.3.3 融合蛋白存在形式的检测及纯化 | 第35-37页 |
| 4.4 桃PpSUT2多克隆抗体的特异性分析 | 第37-38页 |
| 4.4.1 抗血清效价的测定 | 第37页 |
| 4.4.2 多克隆抗体的Western blot分析 | 第37-38页 |
| 4.5 桃组织中PpSUT2的蛋白表达分析 | 第38-40页 |
| 5 讨论与结论 | 第40-43页 |
| 5.1 讨论 | 第40-42页 |
| 5.1.1 桃SUTs基因的序列分析 | 第40页 |
| 5.1.2 桃SUTs都具有蔗糖转运活性 | 第40页 |
| 5.1.3 桃PpSUT2基因的原核表达及抗体制备 | 第40-41页 |
| 5.1.4 桃组织中PpSUT2的蛋白特异性表达 | 第41-42页 |
| 5.2 结论 | 第42-43页 |
| 6 后续研究设想 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| Abstract | 第50-51页 |
