致谢 | 第4-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
1 文献综述 | 第10-19页 |
1.1 实时荧光定量PCR | 第10-11页 |
1.2 内参基因在QRT-PCR中的必要性 | 第11-12页 |
1.3 内参基因 | 第12-17页 |
1.3.1 内参基因研究背景 | 第13-14页 |
1.3.2 内参基因研究动态 | 第14-16页 |
1.3.3 内参基因研究前景 | 第16-17页 |
1.4 基因的筛选方法 | 第17-19页 |
2 引言 | 第19-20页 |
3 试验材料与方法 | 第20-27页 |
3.1 试验材料 | 第20-23页 |
3.1.1 植物材料 | 第20-22页 |
3.1.1.1 植物营养器官材料 | 第20页 |
3.1.1.2 植物生殖器官材料 | 第20-21页 |
3.1.1.3 非生物胁迫因子诱导 | 第21页 |
3.1.1.4 生物胁迫因子(霜霉病病菌)诱导 | 第21-22页 |
3.1.2 试验试剂 | 第22-23页 |
3.1.3 试验仪器 | 第23页 |
3.2 试验方法 | 第23-27页 |
3.2.1 引物设计 | 第23-24页 |
3.2.2 总RNA的提取 | 第24-25页 |
3.2.3 RNA的浓度及纯度检测 | 第25页 |
3.2.4 cDNA第一条链的合成 | 第25-26页 |
3.2.5 荧光定量RT-PCR | 第26-27页 |
3.2.6 荧光定量PCR模板的稀释 | 第27页 |
3.2.7 引物的扩增效率计算 | 第27页 |
4 结果分析 | 第27-44页 |
4.1 RNA的提取 | 第27页 |
4.2 QRT-PCR扩增溶解曲线分析 | 第27-28页 |
4.3 内参基因表达的标准曲线 | 第28页 |
4.4 内参基因的筛选 | 第28-44页 |
4.4.1 甜瓜生长发育期不同组织样品中的内参基因Ct值分析 | 第28-29页 |
4.4.2 甜瓜生物胁迫和非生物胁迫样品中的内参基因Ct值分析 | 第29页 |
4.4.3 营养器官的结果分析 | 第29-32页 |
4.4.3.1 geNorm分析 | 第29-30页 |
4.4.3.2 NormFinder分析 | 第30-31页 |
4.4.3.3 BestKeeper分析 | 第31-32页 |
4.4.4 生殖器官的结果分析 | 第32-35页 |
4.4.4.1 geNorm分析 | 第32-33页 |
4.4.4.2 NormFinder分析 | 第33-34页 |
4.4.4.3 BestKeeper分析 | 第34-35页 |
4.4.5 甜瓜生长发育期不同组织器官总样品分析 | 第35-38页 |
4.4.5.1 geNorm分析 | 第35-36页 |
4.4.5.2 NormFinder分析 | 第36-37页 |
4.4.5.3 BestKeeper分析 | 第37-38页 |
4.4.6 生物和非生物胁迫结果分析 | 第38-44页 |
4.4.6.1 geNorm分析 | 第38-41页 |
4.4.6.2 NormFinder分析 | 第41页 |
4.4.6.3 BestKeeper分析 | 第41-44页 |
5 结论与讨论 | 第44-48页 |
5.1 结论 | 第44-45页 |
5.1.1 引物的筛选 | 第44页 |
5.1.2 内参基因的筛选结果 | 第44-45页 |
5.1.2.1 营养器官 | 第44-45页 |
5.1.2.2 生殖器官 | 第45页 |
5.1.2.3 逆境胁迫(生物胁迫、非生物胁迫) | 第45页 |
5.1.2.4 所有样品 | 第45页 |
5.2 讨论 | 第45-48页 |
5.2.1 影响荧光定量结果的关键因素的探讨 | 第45-46页 |
5.2.1.1 RNA的提取质量 | 第45页 |
5.2.1.2 cDNA的合成效率 | 第45-46页 |
5.2.1.3 引物的浓度 | 第46页 |
5.2.2 内参基因筛选 | 第46-47页 |
5.2.3 18srRNA | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-56页 |
附录1 试验试剂的配置 | 第56-58页 |
附录2 基因溶解曲线图 | 第58-61页 |
附录3 基因标准曲线图 | 第61-63页 |
ABSTRACT | 第63-64页 |