| 内容摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 枯草芽孢杆菌概述 | 第10-19页 |
| 1.1 芽孢杆菌概述 | 第10-11页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌的分泌机制研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌的表达系统和酶制剂的开发研究 | 第13-15页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌非传统分泌机制的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌分泌蛋白质量控制体系和菌株工程研究进展 | 第16-18页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 溶解性多糖单加氧酶CBP21在枯草杆菌中的分泌表达研究 | 第19-35页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 溶解性多糖单加氧酶表达载体构建 | 第22页 |
| 2.2.3 溶解性多糖单加氧酶信号肽筛选载体的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.4 无缝克隆实验 | 第24-25页 |
| 2.2.5 枯草杆菌基因组总DNA提取的实验方案 | 第25页 |
| 2.2.6 枯草芽孢杆菌感受态的制备方案 | 第25-26页 |
| 2.2.7 CBP21蛋白含量的测定 | 第26页 |
| 2.2.8 枯草芽孢杆菌胞内外蛋白提取实验方案 | 第26-27页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE电泳和western技术 | 第27-29页 |
| 2.2.10 CBP21重组菌生长曲线及其蛋白含量的测定方法 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-33页 |
| 2.3.1 溶解性多糖单加氧酶CBP21基因和信号肽基因的克隆 | 第29页 |
| 2.3.2 CBP21重组菌蛋白表达时间谱及其生长曲线分析 | 第29-30页 |
| 2.3.3 分泌表达载体构建 | 第30-31页 |
| 2.3.4 CBP21在含不同信号引导下的表达分析 | 第31-32页 |
| 2.3.5 含不同信号肽对重组芽胞杆菌分泌CBP21蛋白的影响 | 第32页 |
| 2.3.6 CBP21蛋白质谱鉴定结果 | 第32页 |
| 2.3.7 CBP21胞内残留现象 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 结论 | 第34-35页 |
| 第三章 淬灭酶AI06BS在枯草杆菌中以非传统分泌途径分泌表达 | 第35-55页 |
| 3.1 引言 | 第37-38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-46页 |
| 3.2.1 菌株、质粒、引物和细胞培养条件 | 第38-42页 |
| 3.2.2 载体pWB-AI06BS的构建 | 第42页 |
| 3.2.3 枯草芽孢杆菌突变菌株的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.4 AIO6BS截短和突变体的表达载体的构建 | 第43页 |
| 3.2.5 AIO6BS作为其他蛋白的分泌信号融合载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE和Western blotting | 第44页 |
| 3.2.7 淬灭酶活测定方法 | 第44-45页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第45-46页 |
| 3.3 结果 | 第46-53页 |
| 3.3.1 AIO6BS的表达分析 | 第46-47页 |
| 3.3.2 AIO6BS蛋白的分泌表达与细胞溶解不相关 | 第47页 |
| 3.3.3 AIO6BS protein的分泌不依赖传统的分泌途径 | 第47-49页 |
| 3.3.4 AIO6BS蛋白截短体和突变体的分泌表达 | 第49-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.5 结论 | 第54-55页 |
| 第四章 枯草杆菌胞内蛋白酶工程菌株对重组蛋白分泌表达影响 | 第55-70页 |
| 4.1 引言 | 第57-58页 |
| 4.2 材料与方法 | 第58-63页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 4.2.3 蛋白酶敲除菌株的构建 | 第62-63页 |
| 4.3 结果 | 第63-68页 |
| 4.3.1 胞内蛋白酶敲除载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.3.2 胞内蛋白酶敲除菌株的构建与鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.3 重组蛋白在不同的敲除菌株中的表达分析 | 第65-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-69页 |
| 4.5 结论 | 第69-70页 |
| 第五章 全文总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 博士后期间发表的论文和申请专利 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80页 |
