| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-32页 |
| 1.1 鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）概况 | 第13-21页 |
| 1.1.1 IBD概况 | 第13页 |
| 1.1.2 IBDV的流行病学 | 第13-14页 |
| 1.1.3 IBDV的致病性 | 第14-18页 |
| 1.1.4 IBDV的免疫抑制 | 第18-20页 |
| 1.1.5 IBDV的防控 | 第20-21页 |
| 1.2 IBDV疫苗的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2.1 传统活疫苗和灭活疫苗 | 第21-22页 |
| 1.2.2 IBDV基因工程活疫苗 | 第22页 |
| 1.2.3 亚单位疫苗 | 第22页 |
| 1.2.4 IBDV免疫复合物疫苗 | 第22-23页 |
| 1.2.5 DNA疫苗 | 第23页 |
| 1.2.6 病毒活载体疫苗 | 第23-24页 |
| 1.3 病毒样颗粒（VLP） | 第24-31页 |
| 1.3.1 VLP概述 | 第24-26页 |
| 1.3.2 VLP作为免疫原 | 第26-29页 |
| 1.3.3 VLP作为递呈外源抗原的平台 | 第29-31页 |
| 1.4 IBDV受体的研究 | 第31页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 IBDV-sVP/VLP在酵母中的表达、纯化 | 第32-47页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-36页 |
| 2.1.1 材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1.1 病毒、细胞、菌株和质粒 | 第32页 |
| 2.1.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.2 方法 | 第33-36页 |
| 2.1.2.1 目的基因的获得 | 第33页 |
| 2.1.2.2 酵母表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.1.2.3 重组酵母的构建 | 第34页 |
| 2.1.2.4 重组酵母菌株的筛选鉴定 | 第34页 |
| 2.1.2.5 重组蛋白在摇瓶中的表达 | 第34页 |
| 2.1.2.6 重组蛋白的鉴定和定量 | 第34-35页 |
| 2.1.2.7 重组蛋白的纯化 | 第35页 |
| 2.1.2.8 重组酵母菌的发酵培养 | 第35-36页 |
| 2.1.2.9 IBDV-sVP的室温稳定性实验 | 第36页 |
| 2.2 结果 | 第36-44页 |
| 2.2.1 IBDV-VP2基因的扩增 | 第36页 |
| 2.2.2 重组表达载体的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.3 重组酵母菌株的鉴定与筛选 | 第37-39页 |
| 2.2.4 重组蛋白的摇瓶表达 | 第39-40页 |
| 2.2.5 重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.6 IBDV病毒样颗粒的鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.7 重组蛋白的发酵表达 | 第42-43页 |
| 2.2.8 IBDV-sVP的稳定性 | 第43-44页 |
| 2.3 讨论 | 第44-46页 |
| 2.4 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 IBDV-sVP/VLP的免疫效力及安全性研究 | 第47-60页 |
| 3.1 材料和方法 | 第47-50页 |
| 3.1.1 材料 | 第47页 |
| 3.1.1.1 病毒、细胞和菌株 | 第47页 |
| 3.1.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 3.1.1.3 实验动物 | 第47页 |
| 3.1.2 方法 | 第47-50页 |
| 3.1.2.1 IBDV-sVP/VLP疫苗的制备 | 第47-48页 |
| 3.1.2.2 IBDV-sVP/VLP疫苗免疫攻毒保护实验分组 | 第48-49页 |
| 3.1.2.3 ELISA抗体检测 | 第49页 |
| 3.1.2.4 中和抗体检测 | 第49页 |
| 3.1.2.5 法氏囊组织损伤评价 | 第49-50页 |
| 3.1.2.6 法氏囊组织病毒qRT-PCR | 第50页 |
| 3.1.2.7 安全性试验 | 第50页 |
| 3.1.2.7 统计学分析 | 第50页 |
| 3.2 结果 | 第50-57页 |
| 3.2.1 ELISA抗体水平 | 第50-51页 |
| 3.2.2 中和抗体水平 | 第51-53页 |
| 3.2.3 IBDV-sVP/VLP攻毒保护评价 | 第53-57页 |
| 3.2.4 IBDV-sVP/VLP疫苗的安全性 | 第57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-59页 |
| 3.4 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 运用IBDV-sVP筛选与鉴定与宿主细胞相互作用蛋白 | 第60-71页 |
| 4.1 材料和方法 | 第60-63页 |
| 4.1.1 材料 | 第60页 |
| 4.1.1.1 病毒、细胞和菌株 | 第60页 |
| 4.1.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 4.1.2 方法 | 第60-63页 |
| 4.1.2.1 IBDV ELD50的测定 | 第60页 |
| 4.1.2.2 激光共聚焦实验 | 第60-61页 |
| 4.1.2.3 IBDV-sVP吸附实验 | 第61页 |
| 4.1.2.4 IBDV-sVP的VPOBA | 第61页 |
| 4.1.2.5 蛋白筛选 | 第61页 |
| 4.1.2.6 siRNA的设计 | 第61页 |
| 4.1.2.7 siRNA的转染 | 第61页 |
| 4.1.2.8 DNA的转染 | 第61-62页 |
| 4.1.2.9 流式细胞术筛选 | 第62页 |
| 4.1.2.10 免疫沉淀实验 | 第62页 |
| 4.1.2.11 抗体封闭实验 | 第62页 |
| 4.1.2.12 可溶性蛋白竞争实验 | 第62页 |
| 4.1.2.13 IBDV入侵实验 | 第62页 |
| 4.1.2.14 统计学分析 | 第62-63页 |
| 4.2 结果 | 第63-68页 |
| 4.2.1 IBDV-Gx在DF-1 和DT40细胞上的复制 | 第63页 |
| 4.2.2 IBDV-sVP吸附曲线 | 第63-64页 |
| 4.2.3 IBDV-sVP与宿主细胞膜蛋白相互作用的筛选 | 第64页 |
| 4.2.4 siRNA筛选结果 | 第64-65页 |
| 4.2.5 EGFR蛋白在不同细胞上的表达 | 第65页 |
| 4.2.6 EGFR蛋白和IBDV-Gx的IP验证 | 第65页 |
| 4.2.7 EGFR蛋白下调表达对IBDV-Gx复制的影响 | 第65-66页 |
| 4.2.8 EGFR蛋白过表达对IBDV-Gx复制的影响 | 第66-67页 |
| 4.2.9 可溶性EGFR蛋白对IBDV-Gx复制的影响 | 第67页 |
| 4.2.10 EGFR抗体封闭DT40对IBDV-Gx复制的影响 | 第67-68页 |
| 4.2.11 EGFR抗体封闭DT40对IBDV-Gx侵入的影响 | 第68页 |
| 4.3 讨论 | 第68-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简历 | 第90页 |
