| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 四次跨膜蛋白 | 第12-13页 |
| 1.2 CD81的分子结构 | 第13-14页 |
| 1.3 CD81参与细胞融合 | 第14-16页 |
| 1.4 CD81在免疫系统中的作用 | 第16-18页 |
| 1.4.1 CD81在CD19转运到细胞表面的过程中有重要作用 | 第16-17页 |
| 1.4.2 CD81在B细胞信号传导过程中的作用 | 第17页 |
| 1.4.3 CD81在抗原呈递中的作用 | 第17页 |
| 1.4.4 CD81在T细胞中的作用 | 第17页 |
| 1.4.5 CD81存在于B与T细胞免疫突触(IS)的中央区域 | 第17-18页 |
| 1.5 CD81与人类疾病 | 第18-19页 |
| 1.5.1 CD81与肿瘤侵袭和转移 | 第18页 |
| 1.5.2 CD81与生物标记 | 第18页 |
| 1.5.3 CD81与病毒感染 | 第18-19页 |
| 1.6 卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究 | 第19-22页 |
| 1.6.1 卵母细胞玻璃化冷冻保存方法 | 第20页 |
| 1.6.2 卵母细胞冷冻保护剂 | 第20-21页 |
| 1.6.3 卵母细胞细胞骨架稳定剂 | 第21页 |
| 1.6.4 卵母细胞在冷冻过程中的损伤 | 第21页 |
| 1.6.5 冷冻对卵母细胞结构和发育潜力的影响 | 第21-22页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.8 试验研究内容 | 第23-24页 |
| 1.9 本研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 2 实验一 绵羊卵母细胞玻璃化冷冻对其细胞骨架的影响 | 第25-33页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.1 卵巢来源 | 第25页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.3 实验试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1 卵母细胞的采集及体外成熟培养 | 第26页 |
| 2.2.2 绵羊卵母细胞的成熟鉴定 | 第26页 |
| 2.2.3 卵母细胞的玻璃化冻融 | 第26-27页 |
| 2.2.4 微丝微管核染色 | 第27页 |
| 2.2.5 统计分析 | 第27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.3.1 冻融后卵母细胞微丝的细胞学观察 | 第27-28页 |
| 2.3.2 冻融后卵母细胞微管的细胞学观察 | 第28-29页 |
| 2.3.3 冻融后卵母细胞染色体的细胞学观察 | 第29-31页 |
| 2.3.4 不同发育时期绵羊卵母细胞冷冻解冻后的形态正常率 | 第31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 3 实验二 CD81在绵羊卵巢组织和卵母细胞上的表达 | 第33-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.1 主要实验仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 GV期和MⅡ期卵母细胞的获取 | 第33页 |
| 3.2.2 免疫组织化学法检测CD81在绵羊卵巢中的表达 | 第33-34页 |
| 3.2.3 免疫细胞化学法检测CD81在卵母细胞上的表达 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-36页 |
| 3.3.1 CD81在绵羊卵母细胞上的分布 | 第35-36页 |
| 3.3.2 CD81在绵羊卵巢组织上的分布 | 第36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-39页 |
| 4 实验三 CD81mRNA在冷冻前后不同发育阶段卵母细胞中的表达规律 | 第39-45页 |
| 4.1 实验材料 | 第39页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-41页 |
| 4.2.1 实时荧光定量PCR法检测冻融前后GV期和MⅡ期绵羊卵母细胞中CD81mRNA表达水平 | 第39-41页 |
| 4.2.2 统计学处理 | 第41页 |
| 4.3 结果与分析 | 第41-43页 |
| 4.3.1 CD81基因和GAPDH基因普通PCR扩增 | 第41页 |
| 4.3.2 实时荧光定量PCR结果 | 第41-42页 |
| 4.3.3 CD81基因的时空特异表达分析 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-45页 |
| 5 实验四 CD81在绵羊睾丸、附睾及精子中的表达检测 | 第45-49页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第45页 |
| 5.2 实验方法 | 第45页 |
| 5.3 结果分析 | 第45-47页 |
| 5.3.1 CD81在绵羊睾丸上的分布 | 第45页 |
| 5.3.2 CD81在绵羊精子上的分布 | 第45页 |
| 5.3.3 CD81在绵羊附睾上的分布 | 第45-47页 |
| 5.4 讨论 | 第47-49页 |
| 6 实验五 CD81的表达和超低温冷冻对IVF的影响 | 第49-55页 |
| 6.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 6.1.1 实验仪器 | 第49页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第49页 |
| 6.1.3 主要溶液配制 | 第49-50页 |
| 6.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 6.2.1 绵羊卵母细胞的采集 | 第50页 |
| 6.2.2 绵羊卵母细胞体外成熟 | 第50页 |
| 6.2.3 绵羊卵母细胞的成熟鉴定 | 第50页 |
| 6.2.4 绵羊体外受精 | 第50-51页 |
| 6.2.5 检测精子黏附每卵数 | 第51页 |
| 6.2.6 检测穿透每卵的精子穿透率 | 第51页 |
| 6.2.7 统计分析 | 第51页 |
| 6.3 结果与分析 | 第51-54页 |
| 6.3.1 CD81单克隆抗体对MⅡ期卵母细胞IVF的影响 | 第51-52页 |
| 6.3.2 冻融后GV期卵母细胞对IVF的影响 | 第52-53页 |
| 6.3.3 冻融后MⅡ期卵母细胞对IVF的影响 | 第53-54页 |
| 6.4 讨论 | 第54-55页 |
| 7 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
